Padronização da extração de miRNA circulantes do plasma de pacientes com Hipercolesterolemia Familial

• Processo: 18/21686-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia
• Pesquisador responsável: Mario Hiroyuki Hirata
• Beneficiário: Suellen Rodrigues da Silva
• Instituição Sede: Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia (IDPC). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 16/12899-6 - Caracterização genômica, epigenômica e farmacogenômica de portadores de hipercolesterolemia familial na população brasileira, AP.TEM
• Assunto(s): Biologia molecular Epigênese genética Hipercolesterolemia Expressão gênica MicroRNAs Reação em cadeia por polimerase (PCR) Epigenômica Anticoagulantes Testes hematológicos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Epigenômica | Hipercolesterolemia familial | Biologia Molecular

Resumo

A epigenética é o estudo das modificações reversíveis e herdadas durante a divisão celular que podem mudar a atividade biológica final de uma proteína sem alterar a sequência gênica. Entre os principais mecanismos epigenéticos estão os microRNA (miRNA), os quais atuam no controle da expressão gênica, inibindo a tradução ou levando à degradação do RNA mensageiro. A expressão alterada de alguns miRNA já foi fortemente associada com as doenças cardiovasculares e doenças metabólicas, incluindo as dislipidemias. Contudo, a elucidação do papel dos miRNA no desenvolvimento dessas doenças podem contribuir para a descoberta de novos biomarcadores, assim como, de possíveis alvos para o desenvolvimento de novos de fármacos. Os miRNA têm sido identificados como moléculas chave na regulação de proteínas envolvidas na homeostase do colesterol, como por exemplo, as proteínas codificadas pelos genes SREBP1, SREBP2, ABCA1, LDLR, HMGCR e APOA1. Porém, muitos estudos ainda precisam ser realizados para esclarecer a influência dos miRNA na fisiopatologia da Hipercolesterolemia Familial (HF). Por essa razão, o presente plano de trabalho tem como objetivo padronizar a extração de miRNA circulantes do plasma de indivíduos com HF, para que os mesmos possam ser utilizados em outras etapas do projeto temático ao qual essa bolsa está vinculada. Para isso, o plasma dos pacientes será obtido a partir de amostras de sangue total coletado em tubo contendo anticoagulante EDTA e a extração dos miRNA do plasma será realizada utilizando o kit miRNeasy Serum/Plasma (Qiagen). Inicialmente o protocolo será conduzido de acordo com as recomendações do fabricante. Em seguida, serão avaliados diferentes inputs (volume de plasma) e realizadas adaptações à técnica para otimização do protocolo de acordo com o rendimento obtido. O rendimento será avaliado utilizando um controle exógeno (mir-39) durante a extração e avaliando sua expressão por PCR quantitativa em Tempo Real. Os miRNA extraídos serão mantidos em freezer -80ºC até o momento do uso.