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Produção de marcadores de compartimentos intracelulares específicos para estudo do tráfego de GPCRs e proteínas g através da tecnologia BRET

Processo: 19/00378-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de fevereiro de 2019
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2019
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
Pesquisador responsável:Lucas Tabajara Parreiras e Silva
Beneficiário:Matheus Paulino Romano
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:16/24120-3 - Estudo dos papéis não-canônicos de proteínas G como novos mecanismos de sinalização celular com impacto na descoberta e desenvolvimento de fármacos, AP.JP
Assunto(s):Biologia molecular   Peptídeos e proteínas de sinalização intracelular   Retículo endoplasmático   Mitocôndrias   Pesquisa bibliográfica   Análise espaço-temporal   Microscopia confocal   Fluorescência

Resumo

Por meio de pesquisa bibliográfica, identificaremos proteínas residentes de diferentes compartimentos intracelulares, isto é, que sirvam como marcadores de compartimentos como Golgi, retículo endoplasmático, mitocôndrias e núcleo. Após seleção dos possíveis alvos, construiremos marcadores para diferentes compartimentos intracelulares através de metodologias de Biologia Molecular, fusionando-se tais proteínas, ou domínios de localização das proteínas, a diferentes isoformas de GFP ou RLucII. As construções serão analisadas transfectando células de mamíferos e avaliando-as por microscopia confocal de fluorescência para verificação e confirmação da correta localização. Finalmente, realizaremos experimentos de BRET entre as novas construções e GPCRs ou proteínas G de interesse, com o objetivo de um melhor entendimento da regulação espaço-temporal de tais moléculas.