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Construção de um sistema de amplificação de sinal para riboreguladores

Processo: 18/24272-3
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de abril de 2019
Vigência (Término): 31 de julho de 2020
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Danielle Biscaro Pedrolli
Beneficiário:Rafael Augusto Lopes Franco
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
Assunto(s):Biologia sintética

Resumo

O diagnóstico preciso de doenças virais como Dengue e Zika só é possível hoje por técnicas como ELISA e RT-PCR, que demandam equipamentos laboratoriais e o manuseio por pessoal técnico, o que encarece o diagnóstico e, principalmente, torna o processo moroso. Além disso, essa dependência de estrutura laboratorial torna o diagnóstico inviável em regiões remotas do Brasil e também em outros países tropicais afetados. O desenvolvimento de um kit diagnóstico para tais doenças virais, que seja rápido, de simples manuseio e que gere uma resposta visual, tem o potencial de agilizar o diagnóstico permitindo que o tratamento adequado seja aplicado imediatamente. Este projeto propõe o desenvolvimento de um circuito sintético de expressão gênica in vitro, que sirva para a identificação rápida de RNA viral da Zika e Dengue. Para tanto, serão usados riboreguladores específicos previamente construídos para detecção de RNA viral da Zika e Dengue. O circuito sintético de regulação será construído para amplificar o sinal proveniente dos riboreguladores. Para tanto, será utilizada uma recombinase para controlar o sentido do promotor que irá dirigir a transcrição do gene repórter. Por sua vez, a recombinase terá sua tradução controlada por um dos riboreguladores já construídos. Também serão testadas duas opções de genes repórteres para a reação de expressão gênica in vitro. Pretende-se, assim, obter desenvolver uma resposta ao teste que seja visual. Espera-se assim, construir um circuito genético sintético que possa ser aplicado à detecção de RNA viral para diagnóstico rápido e simples dos vírus da Zika e da Dengue.