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A manutenção e a maturação de uma linhagem celular de oligodendrócitos

Processo: 19/05747-3
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de maio de 2019
Vigência (Término): 31 de março de 2020
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Daniel Martins-de-Souza
Beneficiário:Bradley Joseph Smith
Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:17/25588-1 - Da compreensão básica a biomarcadores clínicos para a esquizofrenia: um estudo multidisciplinar centrado na neuroproteômica, AP.TEM
Assunto(s):Maturação   Linhagem celular   Expressão de proteínas
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Linhagem de células | Maturação | Oligodendrócitos | Linhagem Celular

Resumo

Várias investigações realizadas no projeto principal envolverão células MO3.13. As células MO3.13 expressam as características fenotípicos de oligodendrócitos primários, além dos marcadores de superfície como galactocerebrosidase (GalC) e myelin-associated glycoprotein (MAG). Neste contexto, a caracterização da expressão proteica é um aspecto importante, quando se considera usar MO3.13 como modelo para investigar desordens associadas ao cérebro e o sistema nervoso central, no entanto não é incluída nas caracterizações já estabelecidas. O bolsista manterá esta linhagem celular para futuras investigações e a preparará para as análises proteômicas. As células MO3.13 serão cultivadas em DMEM contendo 10% (v/v) soro fetal bovino, penicilina (100 U/mL) e estreptomicina (100 ¼g/mL) aos 37°C em 5% CO2. Os pellets de células MO3.13 serão homogeneizados em 50 µL de 7M ureia, 2M tioureia, 4% CHAPS, 2% ASB-14 e 70 mM DTT, usando um kit de homogeneização (GE Healthcare). Os lisados proteicos serão centrifugados por 10 min a 14 000 rpm, os sobrenadantes coletados e concentrações de proteína determinadas pelo ensaio Qubit. Cinquenta µg de cada amostra serão diluídos em tampão de amostra para SDS-PAGE, aquecidos por 5 min aos 95°C e separados usando mini-géis de SDS-PAGE 12%. As proteínas serão visualizadas pelo corante Coomassie brilliant blue e cortados. Cada fatia será então sujeitada à digestão in gel, e os peptídeos resultantes serão armazenados aos -20°C antes das análises de espectrometria de massas. Para a maturação destas células, se usará o protocolo estabelecido neste laboratório (Seabra G et al. Methods Mol Biol. 2019; 1916:113-121).

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Publicações científicas (6)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
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SILVA-COSTA, LICIA C.; SMITH, BRADLEY J.; CARREGARI, VICTOR CORASOLLA; SOUZA, GUSTAVO H. M. F.; VIEIRA, ERICA M.; MENDES-SILVA, ANA PAULA; ALMEIDA, VALERIA DE; CARVALHO, BENILTON S.; DINIZ, BRENO S.; MARTINS-DE-SOUZA, DANIEL. Plasma proteomic signature of major depressive episode in the elderly. JOURNAL OF PROTEOMICS, v. 269, p. 9-pg., . (14/10068-4, 19/05155-9, 17/18242-1, 20/09165-6, 16/07948-8, 19/05747-3, 17/25588-1, 19/00098-7, 18/03422-7)
JOSEPH SMITH, BRADLEY; BRANDAO-TELES, CAROLINE; ZUCCOLI, GIULIANA S.; REIS-DE-OLIVEIRA, GUILHERME; FIORAMONTE, MARIANA; SAIA-CEREDA, VERONICA M.; MARTINS-DE-SOUZA, DANIEL. Protein Succinylation and Malonylation as Potential Biomarkers in Schizophrenia. JOURNAL OF PERSONALIZED MEDICINE, v. 12, n. 9, p. 15-pg., . (14/10068-4, 16/07948-8, 17/25055-3, 15/23049-0, 18/01410-1, 18/14666-4, 19/05747-3, 16/07332-7, 13/08711-3, 19/00098-7, 17/25588-1)
NASCIMENTO, JULIANA MINARDI; SAIA-CEREDA, VERONICA M.; ZUCCOLI, GIULIANA S.; REIS-DE-OLIVEIRA, GUILHERME; CARREGARI, VICTOR CORASOLLA; SMITH, BRADLEY J.; REHEN, STEVENS K.; MARTINS-DE-SOUZA, DANIEL. Proteomic signatures of schizophrenia-sourced iPSC-derived neural cells and brain organoids are similar to patients' postmortem brains. CELL AND BIOSCIENCE, v. 12, n. 1, p. 16-pg., . (17/25588-1, 19/25957-2, 14/21035-0, 19/05747-3, 18/14666-4, 19/00098-7, 18/01410-1, 16/07332-7)
SILVA-COSTA, LICIA C.; GARCIA-ROSA, SHEILA; SMITH, BRADLEY J.; BALDASSO, PAULO A.; STEINER, JOHANN; MARTINS-DE-SOUZA, DANIEL. Blood plasma high abundant protein depletion unintentionally carries over 100 proteins. SEPARATION SCIENCE PLUS, v. 2, n. 12, p. 8-pg., . (16/07948-8, 19/05747-3, 17/25588-1, 13/08711-3, 18/03422-7, 14/10068-4)

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