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Clonagem, expressão e purificação da enzima CRK3 de Leishmania mexicana (LmCRK3) e ciclina 6 de Leishmania major (LmCYC6)

Processo: 19/01678-7
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de maio de 2019
Vigência (Término): 30 de abril de 2020
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
Pesquisador responsável:Wagner Alves de Souza Júdice
Beneficiário:Fábio da Silva Siqueira
Instituição-sede: Pró-Reitoria Acadêmica. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Campus da Sede Mogi das Cruzes. Mogi das Cruzes , SP, Brasil
Assunto(s):Leishmaniose   Leishmania mexicana   Clonagem   Expressão de proteínas   Purificação de proteínas   Ciclinas   Desenvolvimento de fármacos

Resumo

As leishmanioses são patologias consideradas negligenciadas pela Organização Mundial da Saúde, aproximadamente 70 países fazem parte da região endêmica da doença, mas vale ressaltar que os mais atingidos são os tropicais e subtropicais. Apesar de os países desenvolvidos relatarem casos, os subdesenvolvidos ou em desenvolvimento são os mais afetados devido à baixa condição sanitária, já que as fêmeas dos vetores utilizam de acúmulo de material orgânico e locais húmidos para a postura dos ovos. Atualmente aproximadamente 2 milhões de pessoas carregam o parasita, e são registrados em média 500 mil novos casos todos os anos. Os atuais tratamentos farmacológicos possuem alta toxicidade e podem levar mais de um semestre, então novos fármacos leishmanicidas estão em estudo. Sabe-se que a CRK3 é essencial para a progressão do ciclo celular do parasita, o que a tornou um grande alvo farmacológico. O presente projeto tem como objetivo a clonagem, expressão e purificação das enzimas LmCRK3, LdCRK3 e da ciclina LmjCYC6. A clonagem será realizada em cepa E. coli dH5± e expressão em cepa E. coli BL21 com indução por IPTG. A purificação será feita por cromatografia de afinidade em coluna de resina de níquel. A confirmação das proteínas alvo se dará por meio da técnica de Western blot. A obtenção dessas enzimas será importante para que em posteriores estudos seja possível a descoberta de novas moléculas inibidoras.