| Processo: | 18/15797-5 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de junho de 2019 |
| Vigência (Término): | 28 de fevereiro de 2022 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Morfologia - Anatomia |
| Pesquisador responsável: | Luiz Gustavo de Almeida Chuffa |
| Beneficiário: | Maira Smaniotto Cucielo |
| Instituição-sede: | Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Transformação celular neoplásica Melatonina Receptores de melatonina Apoptose Carcinoma Neoplasias ovarianas Mitocôndrias Inativação gênica |
Resumo O Câncer de Ovário (CO) é a malignidade mais comum no sistema genital feminino e representa a quinta causa de morte por Câncer devido a sua progressão rápida e resistência aos tratamentos associado com baixo prognóstico. A melatonina (Mel), um neurohormônio secretado pela glândula pineal na fase de escuro, tem mostrado propriedades antitumorais em ensaios in vitro e in vivo. Evidências sugerem que a Mel, quando ligada aos seus receptores de membrana MT1 e MT2, possui um efeito oncostático em vários tipos de Cânceres, incluindo o CO. A Mel parece ter uma relação especial com a mitocôndria, organela responsável pela sua síntese, pelo metabolismo energético, morte e diferenciação celular, entre outros. Assim, o objetivo do presente estudo é avaliar a influência da terapia com melatonina sobre a via de sinalização endógena mitocondrial e a apoptose das células de Carcinoma Ovariano Humano (SKOV-3). E ainda, verificar se os efeitos biológicos resultantes da terapia são dependentes da ativação dos receptores MT1/2 através do silenciamento de RNAs (siRNAs). Para tanto, o trabalho será composto pelos grupos experimentais: grupo controle e grupo exposto a Mel (800, 1600 e 2400 ¼M); os grupos serão subdivididos quanto a presença dos receptores MT1/2 (grupos MT1/2+ tratados ou não com melatonina), ou ausência pelo silenciamento através do uso de siRNA (grupos MT1/2- tratados ou não com melatonina). Será realizado o teste de citotoxicidade celular através do ensaio de MTT, migração e invasão celular por insertos transwell, além do perfil geral de proteínas de adesão via ensaio multiplex. As análises do potencial de membrana mitocondrial, taxa de apoptose (AnexinaV) e ciclo celular serão realizadas por citometria de fluxo. Ainda será investigado a apoptose através da quantificação de proteínas Bcl-2, BAX, citocromo-C e caspase-3 ativa por western blotting. Em paralelo, serão mensurados os níveis de melatonina, lactato e glicose, e as mitocôndrias serão isoladas para análise da melatonina endógena e das enzimas envolvidas com a sua produção (AA-NAT e ASMT). Os achados no presente estudo poderão contribuir para a discussão atual sobre o papel da melatonina no metabolismo alterado das células neoplásicas do CO. (AU) | |