Avaliação in vivo de L-asparaginase humanizada livre e nanoencapsulada em lipossomos

• Processo: 19/06919-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2019
• Vigência (Término): 31 de agosto de 2020
• Área do conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Adalberto Pessoa Junior
• Beneficiário: Eduardo Krebs Kleingesinds
• Supervisor: Paul Frederick Long
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Local de pesquisa: King's College London, Inglaterra
• Vinculado à bolsa: 17/20384-9 - Desenvolvimento de processo de purificação de L-asparaginase humanizada e sua caracterização, BP.DR
• Assunto(s): Lipossomos Leucemia-linfoma linfoblástico de células precursoras Nanotecnologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Asparaginase Humanizada | Leucemia linfoblástica aguda | lipossomos | Nanotecnologia | Purificação e encapsulação de biomoléculas

Resumo

O presente projeto de doutorado faz parte do projeto temático (processo Fapesp 2013/08617-7) visando o desenvolvimento de proteoformas inovadoras da L-asparaginase (ASNase) para aplicação no tratamento da Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). Atualmente, não há produção nacional desse biofármaco. Mais especificamente, investigaremos os processos upstream e downstream de ASNase de Erwinia chrysanthemi expressa por Pichia pastoris em biorreator. Essa linhagem, chamada Glycoswitch®, expressa proteínas com padrões de glicosilação mais semelhantes à glicosilação humana. A associação de diversas áreas, como biologia molecular e nanobiotecnologia, pode melhorar ainda mais os protocolos no tratamento da LLA. Neste contexto, os lipossomos são nanocarreadores formados pela autoagregação de fosfolipídios, capazes de transportar moléculas hidrofílicas como as proteínas. Uma hipótese é que as glicosilações mascaram sítios imunogênicos atenuando a resposta imune quando injetados por via intravenosa. Outra hipótese é quando esta ASNase menos imunogênica é encapsulada nos lipossomos, ocorre um aumento no seu tempo de meia-vida. Assim, o principal objetivo deste estágio é avaliar a atividade da ASNase, o tempo de meia-vida e o título de anticorpos de camundongos Balb/c após a administração das proteoformas da ASNase humanizadas e wild type livre e nanoencapsulada em lipossomas (1,2-dioleoyl-sn -glicerol-3-fosfocolina - DOPC). Os dados desses experimentos irão fornecer uma grande compreensão sobre como o sistema imunológico reage a essas inovações, em comparação com as formulações atuais disponíveis no mercado.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SIMAS, RODRIGO G.; KREBS KLEINGESINDS, EDUARDO; PESSOA JUNIOR, ADALBERTO; LONG, PAUL F.. An improved method for simple and accurate colorimetric determination of l-asparaginase enzyme activity using Nessler's reagent. JOURNAL OF CHEMICAL TECHNOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, v. 96, n. 5, JAN 2021. (19/06919-2, 19/12295-1)

KLEINGESINDS, EDUARDO KREBS; PARIZOTTO, LETICIA DE ALMEIDA; EFFER, BRIAN; MONTEIRO, GISELE; LONG, PAUL F.; ARROYO-BERDUGO, YOANA; BEHRENDS, VOLKER; ESPOSITO, MARIA TERESA; CALLE, YOLANDA; PESSOA-JR, ADALBERTO. Downstream process and evaluation of the concomitant impact of a recombinant glycosylated L-asparaginase on leukemic cancer cells and the bone marrow tumor microenvironment. Process Biochemistry, v. 131, p. 11-pg., 2023-06-09. (19/06919-2, 13/08617-7, 15/07749-2, 18/03734-9, 17/25065-9, 17/20384-9, 18/15104-0)