Efeitos da radiação ionizante e quebras na dupla fita de DNA (DSB) sobre o cariótipo molecular de T. cruzi

• Processo: 19/07916-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: José Franco da Silveira Filho
• Beneficiário: Karina de Azevedo Vieira Honório
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 16/15000-4 - Trypanosoma cruzi: variabilidade genômica intra- e interespecífica e mecanismos de invasão/evasão celular, AP.TEM
• Assunto(s): Biologia molecular Reparo do DNA Dano ao DNA Radiação ionizante Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: chromosome | DNA repair | Double strand breaks | ionizing radiation | Karyotype | recombination | Biologia molecular de T. cruzi

Resumo

Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, é uma célula altamente resistente à radiação ionizante. Pode sobreviver a doses de radiação gama que excedem consideravelmente as doses absolutamente letais para células de mamíferos. Lesões mais complexas e possivelmente mais nocivas às células são as quebras duplas no DNA (DSBs), que podem ser reparadas por mecanismos de recombinação homólogos ou não-homólogos. Os mecanismos de reparo do DNA podem conferir vantagem à sobrevivência do T. cruzi em células hospedeiras de mamíferos, nas quais o estresse oxidativo e a consequente formação de radicais livres podem causar lesões no DNA. A exposição desse parasita à radiação ionizante produz intensa quebra cromossômica, visualizada pela degradação das bandas cromossômicas logo após a irradiação. Em seguida, o DNA genômico fragmentado é gradualmente reconstruído e o padrão de bandas cromossômicas é restaurado. Nós levantamos a hipótese de que uma pequena porcentagem de células da população é capaz de reparar as lesões e reconstruir o cariótipo. Para testar esta hipótese, é importante estimar o número de células viáveis após a irradiação necessária para assegurar a retomada do crescimento. Independente das causas de lesão no DNA, as células ativam mecanismos de defesas, tais como bloqueio do ciclo celular ("cell cycle checkpoint arrest"), apoptose e reparo do DNA, fenômenos estes que podem ser detectados e quantificados. Epimastigotas de T. cruzi serão irradiados com doses de 100 e 500 Gy e mantidos em cultura axênicas por 2-3 semanas, determinando-se periodicamente os parâmetros citados acima (viabilidade celular, bloqueio do ciclo celular - "cell cycle checkpoint arrest" -, apoptose e reparo do DNA) e o cariótipo molecular por PFGE. Pretendemos assim obter nova informação sobre os mecanismos envolvidos na reconstrução dos cromossomos do parasita.