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Estrutura da secretina do pilus tipo IV de Xanthomonas citri

Processo: 18/21076-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de maio de 2019
Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2022
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
Pesquisador responsável:Cristiane Rodrigues Guzzo Carvalho
Beneficiário:Gabriel Guarany de Araujo
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:17/17303-7 - Estrutura e função de sistemas de secreção bacterianas, AP.TEM
Bolsa(s) vinculada(s):19/26988-9 - Estudo por criomicroscopia eletrônica da adsorção de um bacteriófago específico para pilus tipo IV ao seu receptor, BE.EP.DR
Assunto(s):Biologia estrutural   Secretina   Xanthomonas citri   Microscopia crioeletrônica

Resumo

Pili tipo IV (T4P) são filamentos extracelulares retráteis de bactérias que permitem sua motilidade e orientação sobre superfícies. Em espécies de Xanthomonas, um gênero notório por seus membros fitopatogênicos, T4P foi associado com processos de formação de biofilmes, adesão, e virulência. A maquinaria de secreção de T4P em Xanthomonas é um grande complexo de proteínas que atravessa as membranas da célula, por onde as subunidades do pilus são polimerizadas e translocadas ao meio extracelular. Este projeto de doutorado visa estudar o subcomplexo secretina que forma o canal na membrana externa por onde cruza o filamento. Para isto, será determinada sua estrutura tridimensional detalhada através da técnica de criomicroscopia eletrônica (cryo-EM). A secretina é constituída por PilQ, que se multimeriza para formar o canal. Esta proteína será clonada em vetores para adição de etiquetas de purificação e expressa, paralelamente, in vivo (em Xanthomonas citri pv. citri 306) e heterologamente em E. coli. Seu gene correspondente será deletado e complementado com os vetores, e será aferido se assim foram mantidas as propriedades fenotípicas in vivo da maquinaria de T4P editada. A secretina será purificada destas culturas e caracterizada por SEC-MALS e microscopia eletrônica de transmissão antes de ser levadas para cryo-EM para a determinação da sua estrutura. Por fim, se espera obter um modelo deste complexo essencial para T4P que direcionará futuros estudos em Xanthomonas. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ALINE DIAS DA, PURIFICACAO; NATHALIA MARINS DE, AZEVEDO; GABRIEL GUARANY DE, ARAUJO; ROBSON FRANCISCO DE, SOUZA; RODRIGUES, GUZZO CRISTIANE. The World of Cyclic Dinucleotides in Bacterial Behavior. Molecules, v. 25, n. 10 MAY 2020. Citações Web of Science: 0.
DANIELLE BASTOS ARAUJO; RAFAEL RAHAL GUARAGNA MACHADO; DEYVID EMANUEL AMGARTEN; FERNANDA DE MELLO MALTA; GABRIEL GUARANY DE ARAUJO; CAIRO OLIVEIRA MONTEIRO; ERIKA DONIZETTI CANDIDO; CAMILA PEREIRA SOARES; FERNANDO GATTI DE MENEZES; ANA CAROLINA CORNACHIONI PIRES; RÚBIA ANITA FERRAZ SANTANA; AMANDA DE OLIVEIRA VIANA; ERICK DORLASS; LUCIANO THOMAZELLI; LUIS CARLOS DE SOUSA FERREIRA; VIVIANE FONGARO BOTOSSO; CRISTIANE RODRIGUES GUZZO CARVALHO; DANIELLE BRUNA LEAL OLIVEIRA; JOÃO RENATO REBELLO PINHO; EDISON LUIZ DURIGON. SARS-CoV-2 isolation from the first reported patients in Brazil and establishment of a coordinated task network. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 115, p. -, 2020.

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