Identificação de fatores de estresse e sua influência em alterações no genótipo-fenótipo durante a produção de L-Asparaginase por Escherichia coli

• Processo: 19/12295-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Vigência (Início): 01 de outubro de 2019
• Vigência (Término): 30 de setembro de 2020
• Área do conhecimento: Engenharias - Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Adalberto Pessoa Junior
• Beneficiário: Rodrigo Gabriel Simas
• Supervisor: Paul Frederick Long
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Local de pesquisa: King's College London, Inglaterra
• Vinculado à bolsa: 18/24926-3 - Produção de L-asparaginase por Escherichia coli recombinante em cultivo de alta densidade para uma aplicação farmacêutica, BP.DR
• Assunto(s): Proteômica Escherichia coli L-asparaginase Engenharia de bioprocessos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Escherichia coli | High Cell Density Cultivation | L-asparaginase | Proteomics | Transcriptomics | Engenharia de Bioprocessos

Resumo

Leucemia Linfóide Aguda (LLA) é um câncer hematológico, que ocorre predominantemente em crianças. A enzima L-Asparaginase (ASNase) é utilizada em todos os protocolos para tratar LLA, resultando em cera de 90% de cura em crianças. O principal objetivo do presente projeto de doutorado (Processo FAPESP 2018/24926-3) é desenvolver um bioprocesso industrialmente atrativo para a produção de ASNase em biorreatores, como uma fase necessária para o escalonamento e futura produção industrial. Estudos iniciais foram realizados utilizando uma cepa de Escherichia coli recombinante contendo um plasmídeo para a expressão de ASNase. Entre três meios de cultura testados, um meio quimicamente definido foi escolhido para estudos posteriores em biorreatores. Utilizando a estratégia de batelada alimentada, foi possível atingir alta densidade celular, com 50 g/L de biomassa seca em biorreator. Como auxílio ao desenvolvimento do processo, uma análise combinada de transcriptoma e proteoma quantitativo será realizada no Centro de Proteômica do King's College London, para monitorar alterações no genótipo-fenótipo em resposta a condições de estresse durante o cultivo em batelada alimentada. A presente proposta é um esforço conjunto entre a Universidade de São Paulo e o KCL ara desenvolver um processo industrial de produção de ASNase, tendo em vista o potencial científico e tecnológico dessas instituições. A proposta também é parte de um programa de duplo doutorado entre as faculdades de ciências farmacêuticas de ambas instituições.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SIMAS, RODRIGO G.; KREBS KLEINGESINDS, EDUARDO; PESSOA JUNIOR, ADALBERTO; LONG, PAUL F.. An improved method for simple and accurate colorimetric determination of l-asparaginase enzyme activity using Nessler's reagent. JOURNAL OF CHEMICAL TECHNOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, v. 96, n. 5, JAN 2021. (19/06919-2, 19/12295-1)