Produção, purificação e estudos estruturais de enzimas acessórias à degradação da xilana

• Processo: 19/10754-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Vigência (Início): 01 de julho de 2019
• Vigência (Término): 30 de junho de 2021
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Mário Tyago Murakami
• Beneficiário: Gabriela Araújo Ribeiro da Silva
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovações (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 15/26982-0 - Explorando novas estratégias para a despolimerização de polissacarídeos da parede celular vegetal: da estrutura, função e desenho racional de hidrolases glicosídicas às implicações biológicas e potenciais aplicações biotecnológicas, AP.TEM
• Assunto(s): Enzimas Endo-1,4-beta-xilanases Purificação de proteínas Cristalografia de proteínas Clonagem
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: clonagem genica | cristalização de proteínas | enzimas | Expressão heteróloga de proteínas | Purificação de Proteínas | xilana | estudos estruturais de enzimas

Resumo

A xilana é um polissacarídeo composto por uma cadeia de resíduos de b-D-xilose unidos por ligações 1,4, que podem ser substituídas por cadeias laterais de arabinose, ácido D-glucurônico, ácido 4-O-metil-D-glucurônico, ácido acético e ácido ferúlico/p-cumárico. Devido à sua complexidade, diversas enzimas são necessárias para a completa degradação da xilana. Nesse projeto pretendemos estudar 3 enzimas de Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) relacionadas à degradação de xilana: anotadas como acetil-xilana esterase, alpha-glucuronidase e hipotética (com similaridade de sequência com alpha-glucuronidases). As proteínas serão produzidas em Escherichia coli, purificadas por cromatografia líquida e analisadas por métodos biofísicos. Em uma segunda etapa, as proteínas serão submetidas a ensaios de cristalização visando a determinação da estrutura. Os estudos funcionais serão realizados em paralelo pela Dra. Camila Santos. Caso necessário, mutantes poderão ser produzidos para a complementação do estudo. Esses resultados complementarão os estudos do grupo com enzimas de Xac que atuam na xilana, como as já caracterizadas xilanases, beta-xilosidases e alpha-L-arabinofuranosidases.