Modelos de biofilmes multiespécies para o estudo de novas estratégias de tratamento das infecções endodônticas persistentes/secundárias

• Processo: 19/12908-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Pesquisa
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2020
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
• Pesquisador responsável: Ericka Tavares Pinheiro
• Beneficiário: Ericka Tavares Pinheiro
• Pesquisador Anfitrião: Thomas Thurnheer
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Zurich (UZH), Suíça
• Assunto(s): Periodontite periapical Biofilmes Peptídeos catiônicos antimicrobianos Hibridização in situ fluorescente Sequenciamento de nova geração
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: antimicrobial peptides | biofilms | fluorescence in situ hybridization (FISH) | Next generation Sequence (NGS) | polymicrobial infections | post-treatment apical periodontitis | Endodontia

Resumo

A periodontite apical pós-tratamento é uma doença polimicrobiana. A identificação da composição bacteriana ativa nas infecções endodônticas é essencial para direcionar estratégias eficazes de tratamento. Recentemente, novas abordagens têm sido sugeridas para a remoção de infecções associadas a biofilmes polimicrobianos, incluindo o uso de inibidores do quorum-sensing, enzimas e peptídeos ou aminoácidos antimicrobianos. Recentemente, resultados promissores foram mostrados na inibição da formação de biofilme e/ou diminuição da viabilidade de biofilmes mono-espécies formados por espécies bacterianas orais ou não-orais. No entanto, até o momento, há pouca informação sobre a eficácia das abordagens acima citadas sobre biofilmes multiespécies. Objetivos: Os objetivos deste estudo serão os seguintes: (a) investigar a comunidade bacteriana ativa em dentes com periodontite apical pós-tratamento; (b) examinar os padrões de colonização bacteriana / disposição espacial das bactérias nos cones de guta-percha; e (c) explorar as propriedades antimicrobianas de uma mistura de peptídeos antimicrobianos constituída do lantibiótico nisina e de D-aminoácidos (DDAs) em um modelo de biofilme endodôntico multiespécies. Métodos: Sequeciamento de nova geração (Next Generation Sequence - NGS) baseadas em RNA ribossômico (rRNA) e genes rDNA serão utilizadas para análise de amostras de canais radiculares de dentes com periodontite apical pós-tratamento. O DNA e o RNA serão extraídos das amostras e o DNA complementar (cDNA) será sintetizado por meio da reação de transcrição reversa. DNA e cDNA serão submetidos a PCR com primers que amplificam a região V1-V2 do gene 16S rRNA seguido da análise NGS. A relação entre o rRNA e rDNA de cada unidade taxonômica operacional (OTU) será utilizada como um índice de atividade metabólica de bactérias nas amostras de canais radiculares. A fim de fornecer informações adicionais sobre a colonização bacteriana dos materiais de obturação, as amostras de guta-percha dos canais radiculares serão analisadas utilizando hibridização fluorescente in situ (FISH) e microscopia confocal de varredura a laser (CLSM). Adicionalmente, um modelo de biofilme subgengival modificado, que consiste de 11 espécies, será exposto a uma mistura de peptídeos antimicrobianos e DDAs isolados ou combinados com NaOCl 1%. A viabilidade do biofilme será avaliada pela contagem de unidades formadoras de colônia (UFCs) e análise de imagem por CLSM após coloração de viabilidade bacteriana. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

NARDELLO, LAURA C. L.; AMADO, PAMELA P. P.; FRANCO, DIEGO C.; CAZARES, ROBERTO X. R.; NOGALES, CARLOS G.; MAYER, MARCIA P. A.; KARYGIANNI, LAMPRINI; THURNHEER, THOMAS; PINHEIRO, ERICKA T.. Next-Generation Sequencing to Assess Potentially Active Bacteria in Endodontic Infections. JOURNAL OF ENDODONTICS, v. 46, n. 8, p. 1105-1112, AUG 2020. (19/12908-3)

PINHEIRO, ERICKA T.; KARYGIANNI, LAMPRINI; ATTIN, THOMAS; THURNHEER, THOMAS. Antibacterial Effect of High-Purity Nisin Alone and in Combination with D-Amino Acids or Chlorhexidine in an Endodontic-Like Biofilm Model. ANTIBIOTICS-BASEL, v. 10, n. 2, FEB 2021. (19/12908-3)

PINHEIRO, ERICKA T.; KARYGIANNI, LAMPRINI; ATTIN, THOMAS; THURNHEER, THOMAS. Antibacterial Effect of Sodium Hypochlorite and EDTA in Combination with High-Purity Nisin on an Endodontic-like Biofilm Model. ANTIBIOTICS-BASEL, v. 10, n. 9, SEP 2021. (19/12908-3)

PEREIRA, ANA C. C.; AGUIAR, ALANA P. S.; ARAUJO, LETICIA M. P.; DANTAS, LARISSA O.; MAYER, MARCIA P. A.; KARYGIANNI, LAMPRINI; THURNHEER, THOMAS; PINHEIRO, ERICKA T.. Antibiofilm Activity of LL-37 Peptide and D-Amino Acids Associated with Antibiotics Used in Regenerative Endodontics on an Ex Vivo Multispecies Biofilm Model. LIFE-BASEL, v. 12, n. 11, p. 8-pg., 2022-11-01. (19/12908-3)