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Proteostase mediada pela chaperona molecular HSP70 em células endoteliais em resposta à força hemodinâmica

Processo: 19/20435-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Apoio a Jovens Pesquisadores
Vigência (Início): 01 de setembro de 2019
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2022
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Celular
Pesquisador responsável:Thaís Larissa Araujo de Oliveira Silva
Beneficiário:Thaís Larissa Araujo de Oliveira Silva
Instituição-sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:18/13739-8 - Proteostase mediada pela chaperona molecular HSP70 em células endoteliais em resposta à força hemodinâmica, AP.JP
Assunto(s):Biologia celular   Chaperonas moleculares   Proteínas de choque térmico HSP70   Biologia vascular

Resumo

A chaperona molecular HSP70 é o membro mais abundante do chaperoma. No contexto vascular, as únicas proteínas clientes da HSP70 conhecidas em células endoteliais (ECs) são nucleolina e CLEC14a, proteínas envolvidas na angiogênese associada ao tumor. Experimentos de perda de função em ECs em condições estáticas promoveram efeitos gerais como inibição da migração, formação de tubo e fosforilação da eNOS e AKT em resposta a VEGF. No vaso, a principal força hemodinâmica que controla o fenótipo endotelial é a força de cisalhamento ou shear stress. Neste contexto, a quantificação da fração e identidade das proteínas que necessitam da HSP70 para alcançar o estado nativo permitirá aprofundar o entendimento das bases moleculares da fisiologia vascular. Neste projeto os objetivos são: (1) identificar clientes da HSP70 em ECs submetidas a fluxo laminar e turbulento através da adaptação original da técnica de BONCAT (marcação com aminoácido não canônico biortogonal) seguida de imunoprecipitação da HSP70 e espectometria de massa, (2) avaliar a formação de complexos de alto peso molecular com gel Nativo e o seu isolamento através de pull down com YK5-biotin, (3) como modelo de doença e de perda de função da HSP70, utilizaremos as ECs primárias isoladas da artéria pulmonar de pacientes com tromboembolismo pulmonar hipertensivo (TEPH). Descobrimos por imuno-histoquímica que há redução significativa na marcação da HSP70 no tecido adjacente ao trombo e que as ECs isoladas de pacientes com TPEH quando submetidas a shear stress de alta magnitude (patológico na artéria pulmonar) apresentam baixo nível de expressão da HSP70 confirmando estas células como excelente modelo. Esse resultado levanta a hipótese de que um estresso crônico como shear stress regula o proteoma resultando em disfunção endotelial. A análise longitudinal temporal e comparativa de shear stress fisiológico e patológico fornecerá visão mecanística do enovelamento proteico mediada pela HSP70, com potencial identificação de alvos moleculares. Estas descobertas devem contribuir para avanços conceituais e implicações fisiopatológicas da HSC/P70 na resposta da célula endotelial à força hemodinâmica.

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SALIBE-FILHO, WILLIAM; ARAUJO, THAIS L. S.; MELO, EVERTON G.; COIMBRA, LUIZA B. C. T.; LAPA, MONICA S.; ACENCIO, MILENA M. P.; FREITAS-FILHO, ORIVAL; CAPELOZZI, VERA LUIZA; TEIXEIRA, LISETE RIBEIRO; FERNANDES, CAIO J. C. S.; JATENE, FABIO BISCEGLI; LAURINDO, FRANCISCO R. M.; TERRA-FILHO, MARIO. Shear stress-exposed pulmonary artery endothelial cells fail to upregulate HSP70 in chronic thromboembolic pulmonary hypertension. PLoS One, v. 15, n. 12 DEC 3 2020. Citações Web of Science: 0.

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