Proteostase mediada pela chaperona molecular HSP70 em células endoteliais em resposta à força hemodinâmica

• Processo: 19/20435-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Jovens Pesquisadores
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2019
• Vigência (Término): 31 de dezembro de 2024
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Celular
• Pesquisador responsável: Thaís Larissa Araujo de Oliveira Silva
• Beneficiário: Thaís Larissa Araujo de Oliveira Silva
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/13739-8 - Proteostase mediada pela chaperona molecular HSP70 em células endoteliais em resposta à força hemodinâmica, AP.JP
• Assunto(s): Biologia celular Chaperonas moleculares Proteínas de choque térmico HSP70 Biologia vascular Tensão de cisalhamento
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biologia vascular | Chaperonas moleculares | enovelamento proteico | Hsp70 | shear stress | tromboembolismo pulmonar hipertensivo | Biologia Celular

Resumo

A chaperona molecular HSP70 é o membro mais abundante do chaperoma. No contexto vascular, as únicas proteínas clientes da HSP70 conhecidas em células endoteliais (ECs) são nucleolina e CLEC14a, proteínas envolvidas na angiogênese associada ao tumor. Experimentos de perda de função em ECs em condições estáticas promoveram efeitos gerais como inibição da migração, formação de tubo e fosforilação da eNOS e AKT em resposta a VEGF. No vaso, a principal força hemodinâmica que controla o fenótipo endotelial é a força de cisalhamento ou shear stress. Neste contexto, a quantificação da fração e identidade das proteínas que necessitam da HSP70 para alcançar o estado nativo permitirá aprofundar o entendimento das bases moleculares da fisiologia vascular. Neste projeto os objetivos são: (1) identificar clientes da HSP70 em ECs submetidas a fluxo laminar e turbulento através da adaptação original da técnica de BONCAT (marcação com aminoácido não canônico biortogonal) seguida de imunoprecipitação da HSP70 e espectometria de massa, (2) avaliar a formação de complexos de alto peso molecular com gel Nativo e o seu isolamento através de pull down com YK5-biotin, (3) como modelo de doença e de perda de função da HSP70, utilizaremos as ECs primárias isoladas da artéria pulmonar de pacientes com tromboembolismo pulmonar hipertensivo (TEPH). Descobrimos por imuno-histoquímica que há redução significativa na marcação da HSP70 no tecido adjacente ao trombo e que as ECs isoladas de pacientes com TPEH quando submetidas a shear stress de alta magnitude (patológico na artéria pulmonar) apresentam baixo nível de expressão da HSP70 confirmando estas células como excelente modelo. Esse resultado levanta a hipótese de que um estresso crônico como shear stress regula o proteoma resultando em disfunção endotelial. A análise longitudinal temporal e comparativa de shear stress fisiológico e patológico fornecerá visão mecanística do enovelamento proteico mediada pela HSP70, com potencial identificação de alvos moleculares. Estas descobertas devem contribuir para avanços conceituais e implicações fisiopatológicas da HSC/P70 na resposta da célula endotelial à força hemodinâmica.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SALIBE-FILHO, WILLIAM; ARAUJO, THAIS L. S.; MELO, EVERTON G.; COIMBRA, LUIZA B. C. T.; LAPA, MONICA S.; ACENCIO, MILENA M. P.; FREITAS-FILHO, ORIVAL; CAPELOZZI, VERA LUIZA; TEIXEIRA, LISETE RIBEIRO; FERNANDES, CAIO J. C. S.; et al. Shear stress-exposed pulmonary artery endothelial cells fail to upregulate HSP70 in chronic thromboembolic pulmonary hypertension. PLoS One, v. 15, n. 12, DEC 3 2020. (20/11249-3, 19/20435-8, 15/06210-2, 18/13739-8, 13/07937-8)

ALVES, LIVIA A.; NAVEED, HASSAN; FRANCO, EDUARDO M.; GARCIA, MAIRA TERRA; FREITAS, VICTOR A.; JUNQUEIRA, JULIANA C.; BASTOS, DEBORA C.; ARAUJO, THAIS L. S.; CHEN, TSUTE; MATTOS-GRANER, RENATA O.. PepO and CppA modulate Streptococcus sanguinis susceptibility to complement immunity and virulence. VIRULENCE, v. 14, n. 1, p. 16-pg., 2023-12-31. (17/19899-4, 19/20435-8, 18/12248-0, 18/02054-4, 18/13739-8, 21/13074-9)