Caracterização da quinase ATR de Leishmania major e de seu papel na sinalização do estresse no processo de replicação do DNA

• Processo: 19/20731-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 20 de março de 2020
• Data de Término da vigência: 19 de março de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Luiz Ricardo Orsini Tosi
• Beneficiário: Gabriel Lamak Almeida da Silva
• Supervisor: Richard McCulloch
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Glasgow, Escócia
• Vinculado à bolsa: 16/16454-9 - Caracterização da quinase ATR de Leishmania major e de seu papel na sinalização do estresse no processo de replicação do DNA, BP.DD
• Assunto(s): Biologia molecular Genotoxicidade Reparo do DNA Replicação do DNA Dano ao DNA Leishmania
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ATR kinase | DNA repair | DNA replication | genotoxic stress | leishmania | Biologia Molecular de Leishmania

Resumo

As células eucarióticas desenvolveram mecanismos para manter a integridade do genoma, o qual é constantemente desafiado por danos no DNA e impedimentos no processo de replicação. A proteína quinase Ataxia-Telangiectasia and Rad3-related (ATR), um membro da família fosfatidilinositol 3-kinase-like, é um regulador master de respostas eucarióticas a danos no DNA, assegurando a manutenção e estabilidade do genoma. Neste projeto de Doutorado, nós propomos investigar a conservação e relevância funcional da proteína homóloga ATR no metabolismo do DNA de Leishmania major, um protozoário com uma relevante plasticidade genômica. Nós utilizamos o sistema de CRISPR/cas9 para editar o genoma e gerar células ATR-deficientes e ATR-tagged. As células deficientes em ATR apresentam uma progressão no ciclo celular e crescimento significantemente afetado pelo tratamento por hidroxiureia. Nós também observamos um aumento do acumulo de fita simples de DNA e aberrantes níveis de histona H2A fosforilada, um marcador de dano no DNA, em resposta ao estresse replicativo. O principal objetivo dessa proposta de BEPE é expandir a caracterização dos papéis de ATR de L. major na homeostase do genoma, além de fortalece a colaboração com um importante grupo internacional nesse campo de estudo. Como apresentado abaixo, os principais objetivos desta proposta serão realizados com um treinamento in-sito no Wellcome Centre For Integrative Parasitology. (AU)