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Caracterização de novos mecanismos regulatórios e de resistência ao ferro em Chromobacterium violaceum

Processo: 18/19058-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2019
Vigência (Término): 31 de agosto de 2022
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:José Freire da Silva Neto
Beneficiário:Bianca Bontempi Batista
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Regulação da expressão gênica   Fatores de transcrição   Homeostase   Ferro   Chromobacterium violaceum

Resumo

O ferro é um micronutriente essencial, necessário como cofator em diversas reações biológicas, mas seu excesso intracelular pode gerar danos. Em bactérias, a homeostase de ferro envolve a ativação de sistemas de captação em limitação e de sistemas de efluxo e estocagem em excesso deste metal. Neste trabalho, pretendemos identificar e caracterizar novos sistemas de regulação e de efluxo de ferro em Chromobacterium violaceum, uma bactéria ambiental que ocasionalmente causa graves infecções em humanos. A identificação não enviesada de novos fatores de transcrição e sistemas de efluxo de ferro será realizada pela varredura de uma biblioteca de mutantes de transposon para produção alterada de sideróforos e para susceptibilidade ao excesso de ferro, respectivamente. Os fatores de transcrição identificados terão seus regulons definidos e sítios de ligação ao DNA mapeados de modo global por RNA-Seq e ChIP-Seq. Os potenciais sistemas de efluxo identificados serão caracterizados quanto a sua especificidade em conferir resistência e exportar ferro em relação a outros metais. O papel dessas proteínas na patogênese de C. violaceum será testado através de ensaios de virulência em camundongos, utilizando os mutantes da biblioteca de transposon. Os dados obtidos neste trabalho deverão revelar se C. violaceum utiliza outros metaloreguladores além de Fur para regular a homeostase de ferro e se existem sistemas que exportem e aliviem a toxicidade do ferro nesta bactéria. (AU)