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Avaliação funcional do gene NANOG na segregação de linhagens celulares em embriões bovinos

Processo: 19/22649-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de novembro de 2019
Vigência (Término): 31 de outubro de 2021
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Pesquisador responsável:Marcelo Demarchi Goissis
Beneficiário:Letícia Escobar Carreiro
Instituição-sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:17/09576-3 - Estudos sobre mecanismos de diferenciação celular durante o desenvolvimento embrionário inicial em bovinos, AP.JP
Assunto(s):Biotecnologia da reprodução   Fertilização in vitro   Diferenciação celular   Expressão gênica   Proteína 9 associada à CRISPR   Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas

Resumo

O segundo evento de diferenciação celular em mamíferos consiste na separação entre o epiblasto (EPI) e o hipoblasto ou endoderma primitivo(PE). Isto ocorre logo após a segregação da massa celular interna (MCI) e o trofectoderma (TE). Sabe-se em camundongos que NANOG atua opostamente à GATA6 e a via de sinalização por FGF na segregação entre EPI/PE. Análises de expressão gênica agrupam populações celulares de forma que a expressão de NANOG e GATA6 são excludentes. O presente projeto visa testar a hipótese que NANOG é necessário para a especificação de EPI em embriões bovinos. Pretende-se realizar deleção gênica de NANOG mediada por CRISPR/Cas9 em zigotos produzidos in vitro. Os embriões serão então cultivados para avaliação da taxa de formação de blastocistos, distribuição celular, expressão gênica e proteica. Espera-se inibir a formação do EPI e promover uma MCI contendo apenas células de PE. Desta maneira este projeto contribuiria com o entendimento dos mecanismos de segregação da EPI/PE na espécie bovina. (AU)