| Processo: | 19/19834-5 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de fevereiro de 2020 |
| Data de Término da vigência: | 31 de janeiro de 2022 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos |
| Pesquisador responsável: | Julia Pinheiro Chagas da Cunha |
| Beneficiário: | Hellida Marina Costa Silva |
| Instituição Sede: | Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 18/15553-9 - Indo a fundo na regulação da cromatina de Trypanosoma cruzi: identificação de novas moléculas e questionando seu possível impacto no controle da transcrição, AP.JP2 |
| Assunto(s): | Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Proteína 9 associada à CRISPR Trypanosoma cruzi |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | ativação gênica | Cas9 | Crispr | Imunoprecipitação de Cromatina | Proteínas associadas a cromatina | Silenciamento | Trypanosoma cruzi | Biologia de tripanossomatideos |
Resumo No JP1, nosso grupo descreveu muitas proteínas associadas à cromatina, bem como mais de 40 modificações pós-traducionais de histonas diferencialmente expressas em formas de vida replicativas versus não replicativas em Trypanosoma cruzi. Regiões clássicas de eu e heterocromatina estão presentes em seu núcleo e mudam dramaticamente durante a diferenciação de epimastigotas para metacíclicos (E-M). Tradicionalmente, essas regiões da cromatina (e algumas modificações pós-traducionais de histonas) estão associadas à regulação da transcrição. Estes conjuntos de dados, no entanto, não permitem a associação de uma determinada proteína (ou um conjunto de) a um locus genômico específico. Isso, por sua vez, aumentaria a compreensão sobre a biologia da cromatina, possivelmente descrevendo funções não preditas da proteína e do contexto genômico. Recentemente, metodologias de ponta foram desenvolvidas para recuperar proteínas associadas a um determinado locus. Assim, neste projeto avaliaremos o conteúdo de cromatina de regiões específicas do genoma de T. cruzi usando dCas9-Flag (estratégias in vitro e in vivo) guiadas para regiões genômicas específicas (ou seja, TTS, TSS, regiões teloméricas, origens de replicação, regiões promotoras SL; subunidade pequena e 24S do rRNA (transcritos de RNA Pol I); regiões de tRNA e soRNA (transcritos de RNA Pol III)). A comparação entre o conteúdo de cromatina associada de cada locus, juntamente com a avaliação de (possíveis) mudanças durante a diferenciação E-M (e ciclo celular) pode contribuir para uma melhor compreensão dos fatores envolvidos no estabelecimento e manutenção do silenciamento / ativação gênica, bem como como descrever os principais componentes proteicos associados à diferenciação / ciclo celular. Finalmente, o papel de 1-2 alvos será explorado através do sistema CRISPR / Cas9 para a geração de parasitas nocautes (KO) e proteínas marcadas. | |
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