Novas ferramentas para biologia sintética em Saccharomyces cerevisiae

• Processo: 19/17876-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2020
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Elizabeth Bilsland
• Beneficiário: Helena Martins Ribeiro da Cunha Freire
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 15/03553-6 - Engenharia genética de leveduras para a descoberta de novos medicamentos, AP.JP
• Assunto(s): Biologia sintética Membrana plasmática Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas CRISPR-Cas9 Leveduras Saccharomyces cerevisiae Ergosterol
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia Sintetica | Cas-9 | Crispr | Leveduras | Membrana Plamática | Transportadores | Biologia Sintética

Resumo

Drogas dirigidas para o sistema nervoso central frequentemente falham em ensaios clínicos devido ao seu pobre transporte para o cérebro. Por isso, nosso grupo está interessado em desvendar os mecanismos de importação de compostos através de transportadores de membrana plasmática da barreira hemato-encefálica. Utilizando a levedura Saccharomyces cerevisiae geneticamente modificada como plataforma biológica, estudos recentes deram indícios de que é possível expressar transportadores humanos em sua membrana plasmática. Porém, a diference composição de esteróides entre a membrana plasmática humana e de leveduras limita a correta localização de transportadores heterólogos. Estudos indicam que a síntese de colesterol na levedura, garante maior sucesso na expressão de proteínas transmembranares humanas. Nosso presente trabalho visa gerar leveduras com síntese de ergosteróis regulável visando uma incorporação mais eficiente de proteínas humanas na membrana plasmática de S. cerevisiae. Para isso, incorporaremos uma série de promotores sintéticos por CRISPR/Cas9 no genoma de leveduras, os quais inicialmente controlarão a expressão de diferentes proteínas fluorescentes, que podem ser monitoradas facilmente. Quando a regulação ideal do circuito estiver definido, desenvolveremos linhagens que possibilitem a alternância entre a síntese de ergosterol e colesterol, permitindo que a mesma incorpore proteínas de leveduras e humanas em sua membrana plasmática.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ALMEIDA, LUDIMILA DIAS; SILVA, ALI SALIM FARAJ; MOTA, DANIEL CALIXTO; VASCONCELOS, ADRIELLE AYUMI; CAMARGO, ANTONIO PEDRO; PIRES, GABRIEL SILVA; FURLAN, MONIQUE; FREIRE, HELENA MARTINS RIBEIRO DA CUNHA; KLIPPEL, ANGELICA HOLLUNDER; SILVA, SUELEN FERNANDES; et al. Yeast Double Transporter Gene Deletion Library for Identification of Xenobiotic Carriers in Low or High Throughput. MBIO, v. 12, n. 6, NOV-DEC 2021. (17/13015-7, 19/14146-3, 17/01986-8, 18/04240-0, 18/05328-8, 18/16672-1, 15/03553-6, 19/17876-2)