Resumo
Com base no objetivo do referido projeto temático, a proposta de pesquisa tem como principal abordagem a análise proteômica por LC-ESI-MS/MS, para realizar uma avaliação comparativa (qualitativa e quantitativa) de coração, tecidos adiposos marrom e branco dos modelos animais WT e KO e, assim, obter uma maior compreensão sobre os papeis dos genes Opn4, TrpV1, TrpM8, TrpA1 e AdrB1 e suas associações, na fisiologia do ritmo circadiano sob condições de estresse metabólico (Obesidade e Caquexia) e desafio de baixa temperatura. Embora a análise transcriptômica, já realizada pelo grupo de pesquisa, possa fornecer informações valiosas sobre esse cenário, alguns estudos têm relatado diferenças entre dados de transcriptoma e proteoma devido a regulações pós-transcricionais e modificações pós-transducionais (Post-Translational Modifications, PTMs). Análises proteômicas tem demonstrado que algumas PTMs podem regular fatores de transcrição e, consequentemente, modular o transcriptoma. Além disso, as PTMs (ex: fosforilação, ubiquitinação, glicosilação, biotinilação, acetilação) fazem parte do mecanismo pelo qual o relógio circadiano controla o metabolismo. A partir destas informações, os objetivos da proposta são: (1) realizar análise proteômica comparativa dos tecidos de animais WT e KO para os genes citados e também das linhagens celulares. A análise será qualitativa e quantitativa (Label-free quantification ou TMT-MS); (2) usar os dados do transcriptoma como banco de dados para análise proteômica - abordagem proteogenômica; (3) comparar os dados quantitativos da análise transcriptômica e proteômica; (4) a partir dos dados obtidos pelas "ômicas", realizar análise de enriquecimento funcional e criar redes de interação proteína-proteína para compreender as alterações das vias metabólicas e dos processos biológicos; (5) realizar uma análise comparativa de PTMs. (AU)
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