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Produção da metacaspase (yca1) de Saccharomyces Cerevisiae contendo mutações sítio dirigidas: importância do sítio de interação do cálcio para ativação e controle da atividade enzimática

Processo: 20/02244-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Vigência (Início): 01 de maio de 2020
Vigência (Término): 31 de dezembro de 2020
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Mauricio Ferreira Marcondes Machado
Beneficiário:Mariana Nascimento Romero Trujilho
Instituição-sede: Pró-Reitoria Acadêmica. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Campus da Sede Mogi das Cruzes. Mogi das Cruzes , SP, Brasil
Assunto(s):Clonagem   Mutação   Atividade enzimática   Sítios de ligação   Peptídeo hidrolases   Caspases   Saccharomyces cerevisiae

Resumo

O presente projeto de pesquisa visa a produção da metacaspase de Saccharomyces cerevisiae (YCA1) contendo mutações sítio dirigidas nos resíduos de aspartato responsáveis pela interação do cálcio com essa enzima. A metacaspase YCA1 sofre um auto-processamento para se tornar cataliticamente ativa, e necessita do íon cálcio como co-fator enzimático tanto para o seu auto-processamento como para a realização de sua atividade enzimática, por esse motivo pretendemos realizar a produção desta enzima contendo mutações sítio dirigidas nos quatro resíduos de aspartatos responsáveis pela interação da YCA1 com o cálcio, são eles Asp236, Asp252, Asp253 e Asp283 e assim tentarmos elucidar a importância do cálcio no auto-processamento e na regulação da atividade desta protease. Realizaremos duplos mutantes e o mutante de todos os resíduos de aspartato do sítio de interação com o cálcio com o intuito de verificarmos quais destes resíduos são cruciais para a regulação enzimática da YCA1, tal estudo poderá contribuir para o design racional de moléculas que possa inibir e/ou ativar a YCA1 sendo de grande importância pra o desenvolvimento de possíveis novos fármacos.