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Análise funcional de miRNAs e de expressão gênica e proteica

Processo: 20/03784-6
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Vigência (Início): 01 de abril de 2020
Vigência (Término): 31 de outubro de 2020
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
Pesquisador responsável:Erika Cristina Pavarino
Beneficiário:Fabiana de Campos Gomes
Instituição-sede: Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São José do Rio Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:18/09126-0 - Marcadores inflamatórios na síndrome de Down: análise de expressão gênica e funcional., AP.R
Assunto(s):Sistema imune   Inflamação   Expressão gênica   Síndrome de Down   MicroRNAs

Resumo

O sistema imune intrinsecamente deficiente na síndrome de Down (SD) possivelmente contribui para a suscetibilidade aumentada de infecções relacionadas às principais causas de internação e óbito desses indivíduos e também parece favorecer processos neurodegenerativos como a Doença de Alzheimer. A trissomia do cromossomo 21 pode causar mudanças globais na expressão de genes, inclusive daqueles não localizados no cromossomo 21, que regulam processos imunológicos/inflamatórios e outros processos fisiológicos. Objetivos: Esta presente proposta visa investigar se indivíduos com SD apresentam um padrão diferencial de expressão de microRNAs e de genes relacionados ao sistema imunológico/inflamatório em comparação aos indivíduos sem a síndrome e realizar a análise funcional, em células mononucleadas de sangue periférico (PMBCs) de indivíduos com SD, para validar a associação observada in silico entre os genes e os microRNAs estudados. Metodologia: As amostras serão submetidas à extração de RNA, a análise de expressão dos genes e dos MicroRNAs será realizada pela técnica de PCR quantitativa (PCRq), posteriormente será realizada a quantificação das proteínas por Western Blot. Os dados resultantes da análise de expressão dos RNAs e das proteínas serão comparados entre os grupos de indivíduos com SD e sem a síndrome. A avaliação da interação dos MicroRNAs e dos genes serão realizadas por ensaio da luciferase e análise funcional por transfecção. Resultados esperados: Espera-se que o presente estudo possa contribuir para identificação de um padrão diferencial de expressão dos miRNAs hsa-miR-378a-3p, hsa-miR-942-5p e hsa-miR-668-3p e dos genes CCR7, IKBKB e PLA2G2D, relacionados ao sistema imunológico/inflamatório, em crianças com síndrome de Down em comparação aos indivíduos sem a síndrome, e identificar a interação in vitro entre os miRNAs hsa-miR-378a-3p, hsa-miR-942-5p e hsa-miR-668-3p e os genes CCR7, IKBKB e PLA2G2D, respectivamente.

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