Análise funcional de miRNAs e de expressão gênica e proteica

• Processo: 20/03784-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2020
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Erika Cristina Pavarino
• Beneficiário: Fabiana de Campos Gomes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP). São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/09126-0 - Marcadores inflamatórios na Síndrome de Down: análise de expressão gênica e funcional, AP.R
• Assunto(s): Sistema imune Inflamação Síndrome de Down Expressão gênica MicroRNAs
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Inflamação | Sindrome de Down | Sistema Imunológico | Síndrome de Down

Resumo

O sistema imune intrinsecamente deficiente na síndrome de Down (SD) possivelmente contribui para a suscetibilidade aumentada de infecções relacionadas às principais causas de internação e óbito desses indivíduos e também parece favorecer processos neurodegenerativos como a Doença de Alzheimer. A trissomia do cromossomo 21 pode causar mudanças globais na expressão de genes, inclusive daqueles não localizados no cromossomo 21, que regulam processos imunológicos/inflamatórios e outros processos fisiológicos. Objetivos: Esta presente proposta visa investigar se indivíduos com SD apresentam um padrão diferencial de expressão de microRNAs e de genes relacionados ao sistema imunológico/inflamatório em comparação aos indivíduos sem a síndrome e realizar a análise funcional, em células mononucleadas de sangue periférico (PMBCs) de indivíduos com SD, para validar a associação observada in silico entre os genes e os microRNAs estudados. Metodologia: As amostras serão submetidas à extração de RNA, a análise de expressão dos genes e dos MicroRNAs será realizada pela técnica de PCR quantitativa (PCRq), posteriormente será realizada a quantificação das proteínas por Western Blot. Os dados resultantes da análise de expressão dos RNAs e das proteínas serão comparados entre os grupos de indivíduos com SD e sem a síndrome. A avaliação da interação dos MicroRNAs e dos genes serão realizadas por ensaio da luciferase e análise funcional por transfecção. Resultados esperados: Espera-se que o presente estudo possa contribuir para identificação de um padrão diferencial de expressão dos miRNAs hsa-miR-378a-3p, hsa-miR-942-5p e hsa-miR-668-3p e dos genes CCR7, IKBKB e PLA2G2D, relacionados ao sistema imunológico/inflamatório, em crianças com síndrome de Down em comparação aos indivíduos sem a síndrome, e identificar a interação in vitro entre os miRNAs hsa-miR-378a-3p, hsa-miR-942-5p e hsa-miR-668-3p e os genes CCR7, IKBKB e PLA2G2D, respectivamente.