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Construção de uma biblioteca de fragmentos de cDNA de enzimas proteolíticas (peptidases) e serpinas de R. microplus na superfície de fagos filamentosos

Processo: 20/02433-5
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2020
Vigência (Término): 31 de julho de 2022
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Aparecida Sadae Tanaka
Beneficiário:Gabriel Cerqueira Alves Costa
Instituição-sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:19/03779-5 - Uso de phage display como ferramenta no diagnóstico e controle de doenças transmitidas por vetores hematófagos, AP.TEM
Assunto(s):Biologia molecular   Phage display   Peptídeo hidrolases

Resumo

Rhipicephalus (Boophilus) microplus é uma espécie de carrapato presente no Brasil conhecida por parasitar bovinos. Níveis elevados de parasitismo podem debilitar os animais, culminando na redução da produção de leite e carne e gerando prejuízos substanciais ao setor pecuário. Adicionalmente, essa espécie é capaz de transmitir agentes causadores de doenças aos bovinos, dentre elas a babesiose e a anaplasmose, que também contribuem para a redução da produtividade animal, além de serem capazes de elevar os níveis de mortalidade nos rebanhos. O controle de carrapatos nos animais é realizado majoritariamente através do uso de acaricidas químicos de diversas famílias, como piretroides, organofosforados e lactonas macrocíclicas. No entanto, o uso indiscriminado desses agentes tem sido relacionado ao surgimento de populações resistentes de carrapatos, além da contaminação ambiental. Dessa forma, se faz necessária a busca por métodos alternativos de controle que possam ser utilizados nos rebanhos e contribuam para a redução dos níveis de parasitismo realizado pelo carrapato do boi. O principal objetivo do projeto em questão é a identificação de alvos a serem utilizados no controle de R. microplus através da ferramenta intitulada phage display. Primeiramente, por meio do cDNA intestinal do carrapato, será desenvolvida uma biblioteca de sequências relativas a peptidases e serpinas de R. microplus no vetor pCANTAB5E. Em seguida, por meio da técnica de phage display, será feita a seleção dos fagos M13 mais reativos a anticorpos de bovinos resistentes ou previamente imunizados contra o ectoparasito. Os fagos selecionados serão sequenciados e os peptídeos/proteínas serão produzidos em bactéria ou levedura. Paralelamente será desenvolvida uma biblioteca similar, porém apresentada em fagos T7, e a técnica será realizada de acordo com os mesmos parâmetros em colaboração com o Dr. Albert Mulenga da Universidade do Texas. Os alvos selecionados a partir das duas bibliotecas e produzidos como proteínas recombinantes serão testados em ensaios de imunização em bovinos em colaboração com o Dr. Itabajara da Silva Vaz Jr da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Dessa forma, se espera que nesse trabalho sejam geradas novas informações que contribuam para o desenvolvimento de alternativas de controle ao parasitismo de R. microplus. (AU)