Infecção polibacteriana das membranas corioamnióticas: regulação temporal da interação microbiana e resposta inflamatória/oxidativa

• Processo: 21/04439-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Vigência (Início): 01 de junho de 2021
• Vigência (Término): 30 de novembro de 2021
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Márcia Guimarães da Silva
• Beneficiário: Mariana de Castro Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/17279-4 - Infecção polibacteriana das membranas corioamnióticas: regulação temporal da interação microbiana e resposta inflamatória/oxidativa, AP.R
• Assunto(s): Resposta inflamatória Estresse oxidativo Infecções bacterianas Trabalho de parto prematuro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Estresse oxidativo | Infecção Bacteriana | Resposta inflamatória | Imunopatologia da Relação Materno-Fetal

Resumo

Introdução: Embora a etiologia do parto pré-termo seja multifatorial, vários microrganismos têm sido associados à sua patogênese, uma vez que as espécies bacterianas mais frequentemente isoladas no líquido amniótico de pacientes com infecção intra-amniótica são comumente encontradas na microbiota vaginal. Apesar da infecção da cavidade amniótica ser a principal causa do parto pré-termo espontâneo, existe uma complexidade nesse cenário infeccioso por possuir comunidades bacterianas diferentes envolvidas, diferentes interações entre espécies, respostas diferentes aos antibióticos e resultados clínicos distintos. Objetivo: Avaliar a regulação temporal da resposta inflamatória/oxidativa em modelos in vitro de infecção polibacteriana das membranas corioamnióticas com diferentes associações de espécies bacterianas associadas ao parto pré-termo, na presença ou não diferentes espécies de Lactobacillus. Metodologia: Células amnióticas epiteliais imortalizadas (iAECs) serão desafiadas in vitro com diferentes combinações das principais espécies bacterianas identificadas no trato genital inferior de gestações complicadas por parto pré-termo, na concentração de 103 ou 106 Unidades Formadoras de Colônias. Células (iAECs) sem estímulo bacteriano serão usadas como controle negativo e como controle positivo será utilizado o lipopolissacarídeo de Escherichia coli. Para a avaliação da regulação da expressão e produção dos diferentes marcadores inflamatórios/oxidativos aqui propostos, para cada tratamento serão coletados e armazenados a -80ºC os sobrenadantes e tecidos remanescentes nos seguintes momentos: 6 horas,12 horas, 18 horas e 24 horas. Os sobrenadantes obtidos da cultura celular serão submetidos à quantificação proteica pela tecnologia Luminex do painel composto por IL-1², IL-6, sIL-6R, sgp130, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, TNF-±, hBD1, hBD2, hBD3, PTX3 e PGE2. Também será realizada a expressão gênica e proteica de mIL-6R, gp130, TLR-2, TLR-4, TLR-6, NOD1 e NOD2 por PCR em tempo real e Western Blotting, respectivamente. (AU)