Análise das consequências do knockdown da proteína Argonauta-2 na sinaptogênese in vitro

• Processo: 21/03711-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Alexandre Hiroaki Kihara
• Beneficiário: Gabrieli Bovi dos Santos
• Instituição Sede: Centro de Matemática, Computação e Cognição (CMCC). Universidade Federal do ABC (UFABC). Ministério da Educação (Brasil). Santo André , SP, Brasil
• Assunto(s): Retina Sinapses MicroRNAs Transfecção Imunofluorescência Técnicas de silenciamento de genes Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Argonauta-2 | microRNA | retina | Sinapses | Sinaptogênese | Transfecção

Resumo

A retina possui uma morfologia complexa e é composta por mais de 60 tipos celulares altamente especializados para a transdução e modulação da informação luminosa, sendo a transmissão dessa informação coordenada por sinapses químicas e elétricas. Um fator fundamental para o desenvolvimento, maturação celular e sinaptogênica são os pequenos RNAs não-codificantes, também conhecidos como microRNAs (miRNAs). Os miRNAs são responsáveis pela regulação da expressão de genes através da interação com os RNAs mensageiros (RNAm) complementares. Em seu processo de atuação, destaca-se o complexo de silenciamento induzido por RNAs (RISC), composto por diversas proteínas, dentre elas a proteína Agonauta-2 (AGO2), que guia o miRNA ao RNAm-alvo, podendo atuar na clivagem do RNAm-alvo e em sua degradação. Estudos recentes apresentam outras funções atribuídas à AGO2, como papel ativo no desenvolvimento e regeneração axonal e na formação dos cones de crescimento. Entretanto, o papel da AGO2 na sinaptogênese retiniana ainda não é totalmente elucidado. Assim, o objetivo desse projeto é analisar as consequências do knockdown da proteína AGO2 na sinaptogênese in vitro. Para isso, culturas de células primárias retinianas serão transfectadas com o plasmídeo de inibição de AGO2(pLKO.1puro-AGO2), e as consequências na sinaptogênese serão avaliadas por imunofluorescência e western blotting. Com este projeto, pretendemos avaliar a distribuição de proteínas sinápticas, bem como a morfologia dos dendritos e axônios, após o knockdown da proteína AGO2 em células da retina in vitro. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MOVIO, MARILIA INES; DE LIMA-VASCONCELLOS, THEO HENRIQUE; DOS SANTOS, GABRIELI BOVI; ECHEVERRY, MARCELA BERMUDEZ; COLOMBO, ELISABETTA; MATTOS, LEONARDO S.; RESENDE, RODRIGO RIBEIRO; KIHARA, ALEXANDRE HIROAKI. Retinal organoids from human-induced pluripotent stem cells: From studying retinal dystrophies to early diagnosis of Alzheimer?s and Parkinson?s disease. SEMINARS IN CELL & DEVELOPMENTAL BIOLOGY, v. 144, p. 10-pg., 2023-03-17. (21/14227-3, 21/03711-1, 19/17892-8, 20/02035-0, 20/11667-0, 21/11969-9, 17/26388-6)