Desenvolvimento de uma ferramenta para expressão de GFP em células vivas do eucarionte Arcella intermedia, para determinar o envolvimento de Rab-GTPases no processo de formação de carapaça

• Processo: 21/09529-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Vigência (Início): 24 de janeiro de 2022
• Vigência (Término): 23 de janeiro de 2023
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Zoologia
• Pesquisador responsável: Daniel José Galafasse Lahr
• Beneficiário: Alfredo Leonardo Porfirio de Sousa
• Supervisor: Matthew William Brown
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Local de pesquisa: Mississippi State University (MSU), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 19/22692-8 - Desvendando o aparato molecular envolvido no processo de formação de carapaça em tecamebas (Amoebozoa:Arcellinida), BP.DR
• Assunto(s): Biologia evolutiva Amoeba Proteínas de fluorescência verde
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Amoebozoa | Evolutionary novelty | Green Fluorescent Protein tagging | Rab-GFP | Testate amoebae | Protistologia evolutiva

Resumo

Arcellinida (Amoebozoa) é um grupo monofilético de tecamebas caracterizado pela presença de uma carapaça (teca). Como essa linhagem adquiriu a capacidade de construir uma estrutura externa rígida ainda é desconhecido. Para elucidar a origem evolutiva da carapaça dos Arcellinida, é necessário entender seu processo de formação, o que já foi bem descrito para o gênero Arcella com base em dados citomorfológicos. Atualmente, desconhecemos o aparato molecular envolvido na formação de carapaça. Com base nas descrições citomorfológicas e resultados recentes do projeto principal de doutorado do candidato, as subfamílias Rab8 e Rab11 da família de genes Rab GTPase tornaram-se candidatas-chave a estarem envolvidas no processo de formação de carapaça. Aqui, propomos estabelecer e aplicar um protocolo de expressão funcional de Rab-GFP (Green Fluorescent Protein) em Arcella intermedia, com o objetivo de documentar a participação das subfamílias Rab8 e Rab11 no processo de formação de carapaça. Além disso, pretendemos realizar a expressão funcional de Rab-GFP em outros Amoebozoa. Em última análise, o projeto de doutorado principal do candidato e a presente proposta nos permitem lançar luz sobre a origem evolutiva da carapaça dos Arcellinida, enquanto estabelece um framework baseado em transcriptômica de célula-única, filogenética, imunocitoquímica e GFP, adequado para ser aplicado a outros Amoebozoa e micro-eucariontes. (AU)