Validação de metodologias relacionadas à determinação do tamanho dos telômeros, por meio de qPCR, pelo método de SYBR Green em DNA genômico isolado de leucócitos do sangue periférico

• Processo: 21/11563-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia - Análise Toxicológica
• Pesquisador responsável: Gustavo Rafael Mazzaron Barcelos
• Beneficiário: Lucas Cassulatti dos Santos
• Instituição Sede: Instituto de Saúde e Sociedade (ISS). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Baixada Santista. Santos , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/08260-5 - Impacto da exposição ao metilmercúrio (MeHg) sobre o status epigenético e sobre o comprimento dos telômeros, bem como suas interações, em indivíduos de comunidades ribeirinhas amazônicas expostas cronicamente ao metal, via dieta, AP.R
• Assunto(s): Instabilidade genômica Sangue periférico Telômero Toxicidade Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR) SYBR Green Estudos de validação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: instabilidade genômica | qPCR | telômeros | Toxicidade | Toxicologia de Metais

Resumo

O uso de PCR em tempo real é uma técnica muito versátil, pois pode ser aplicada em diversos estudos, que vão desde a obtenção de dados qualitativos, tais como genotipagens, até a análise de dados quantitativos, como estudos de expressão gênica e diversas abordagens epigenéticas. Entretanto, para aperfeiçoamento e eficácia na demanda do uso do equipamento adquirido pelo AP.JP 2013/06033-8 (ABI 7500 Fast, Applied Biosystems) e que será amplamente utilizado para os diversos experimentos referentes à essa proposta. Assim, faz-se necessário a validação de metodologias específicas para os ensaios que envolvam análises quantitativas, por meio do uso de primers e de SYBR Green (ou seja, sem uso de kits com etapas já validadas e estabelecidas), tais como a validação do método para avaliação do tamanho dos telômeros. (AU)