Caracterização do inibidor do fator nuclear kappa B quinase subunidade epsilon (IKBKE) em camundongos mutantes condicionalmente direcionados

• Processo: 21/09946-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: José Cesar Rosa Neto
• Beneficiário: Loreana Sanches Silveira
• Supervisor: Jaswinder K. Sethi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University Hospital Southampton NHS Foundation Trust, Inglaterra
• Vinculado à bolsa: 19/09679-2 - Caracterização da subpopulação de macrófagos com deleção de PPARgamma em modelo de câncer de mama e a influência do treinamento aeróbio moderado, BP.PD
• Assunto(s): Neoplasias Neoplasias mamárias Neoplasias de mama triplo negativas NF-kappa B Fatores de transcrição Macrófagos Imunometabolismo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | Fator de transcrição | Macrófagos | Imunometabolismo

Resumo

O câncer é uma das principais causas de morte no mundo, e o principal tipo de novos casos de câncer em 2020 foi o câncer de mama. Câncer de mama triplo-negativo (TNBC), é responsável por 10-15% de todos os cânceres de mama e é caracterizado pela falta de estrogênio, progesterona e expressão de receptores do fator de crescimento epidérmico. É o mais agressivo e, portanto, as terapias são mais intrincado. As células imunológicas, incluindo monócitos, são recrutadas para o tumor, diferenciam-se e tornam-se macrófagos associados ao tumor (TAMs) que desempenham um papel importante no tumor progressão e metástase. O receptor gama ativado por proliferador de peroxissoma (PPAR³) e o fator nuclear kappa B (NFºB) são dois fatores de transcrição que têm ações opostas. PPAR³a expressão está associada a um ambiente pró-tumorigênico. No entanto, os mecanismos molecularespor trás dos efeitos antiproliferativos do PPAR³ em cânceres de mama ainda são pouco conhecidos. NFºB a atividade promove o ciclo celular, enquanto o PPAR³ inibe a proliferação celular. É importante ressaltar que NFºB é conhecido por regulam negativamente a ativação do PPAR³ e vários mecanismos sugeriram como isso é alcançadono nível molecular. A ativação de NFºB envolve a fosforilação do inibidor de proteínas ºB porIºB quinases (IKK). Inibidor de kappa B quinase epsilon (IKBKE) é um oncogene aberrantemente aumentado em TNBC. No entanto, o papel do IKBKE na sobrevivência e / ou metabolismo da célula imune ou TAM não é conhecido. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo é validar e caracterizar a perfil imunometabólico e regulação de PPAR³ em um modelo sem IKBKE em células mieloides. Métodos: Em primeiro lugar, a ablação IKBKE em células mieloides - especificamente esplenócitos e medula óssea macrófagos diferenciados (BMDM) - serão confirmados por marcadores celulares usando FACs, proteína(western blot) e/ou análise de genes (PCR em tempo real). Em seguida, parâmetros metabólicos e PPAR³a expressão será analisada em macrófagos knockout condicionais de IKBKE por Seahorse e proteína expressão (western blot). Localização de todo o tecido (baço, fígado, tecido adiposo, intestino e pele) deAs proteínas IKBKE e PPAR³ serão determinadas por imunohistoquímica. Co-cultura de de macrófagos derivados de medula de animais nocaute IKBKE usando meio condicionado de células de câncer de mama com PPAR³agonista e antagonista serão feitos para entender o papel complementar de IKBKE e PPAR³. Finalmente, a expressão de IKBKE de amostras de TNBC embebidas em parafina de PPAR³ condicional macrófagos knockout serão verificados por imuno-histoquímica e imagens 3D. (AU)