Estudo da Regulação do promotor, do transcriptoma alvo e da função fisiológica e patológica da proteína HABP4, envolvida em câncer de cólon

• Processo: 20/15071-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2022
• Situação: Interrompido
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Karoline Soares de Freitas
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/05957-6 - Estudo da proteína humana HABP4 e seu ortologo VIG-1 em C. elegans, BE.EP.DR
• Assunto(s): Neoplasias colorretais Expressão gênica Mutagênese Transcriptoma Transdução de sinais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer colorretal | expressão gênica | Habp4 | Mutagênese | promotor | Transcriptoma | Sinalização Celular

Resumo

A HABP4 é uma proteína desestruturada que apresenta alta plasticidade e interação com diversos alvos, genes e proteínas. Estudos recentes sugerem que essa proteína está relacionada à tumorigênese, visto que o aumento ou a diminuição da sua expressão influencia na proliferação celular, controle do ciclo celular e apoptose. O gene Habp4 está localizado no cromossomo 9, ligado a outros quatro genes, formando um haplótipo para câncer de cólon familiar. O câncer colorretal, por sua vez, é o terceiro mais incidente e o segundo que mais faz vítimas no mundo. Algumas mutações no gene Habp4 estão relacionados com esse câncer. Diante do exposto, o presente estudo se propões a estudar o que regula a expressão de HABP4, os alvos regulados por ela e a interação HABP4-proteína em células de carcinoma colorretal humano (HCT116), sob diferentes condições de estresse. Além disso, pretende-se avaliar variantes de mutantes de HABP4 e suas implicações nas células HCT116. As sequências do promotor de Habp4 e dos sítios de ligação de fatores de transcrição serão investigadas por análise in silico e in vitro. Os fatores de transcrição que interagem com a região promotora serão identificados pela expressão de gene repórter. Para tanto, as células HCT116 serão transfectadas com vetor contendo o promotor de Habp4 e o gene repórter luc2, e então submetidas a condições estressoras. A influência de HABP4 sobre a regulação de outros genes será investigada pela análise do transcriptoma geral de células HCT116 selvagem ou nocaute, submetidas ou não a condições de estresse. Para isso, o RNA será extraído e então sequenciado. A interação HABP4-proteína em células HCT116 será realizada por meio da técnica de BioID, seguida de análise por espectrometria de massas. Por fim, a influência da HABP4 na viabilidade celular e o ciclo celular em HCT116 será avaliada a partir de mutações sítio dirigidas no gene Habp4, sendo comparadas as células HCT116 selvagem com as diferentes células mutantes para Habp4. Considerando a relação desse gene/proteína com o câncer colorretal e a relevância dessa doença para a sociedade, o presente estudo se mostra pertinente, permitindo entender melhor a relação do gene Habp4 com o câncer de cólon familiar; e promissor para novas pesquisas que considerem esse gene como um alvo terapêutico para este tipo de câncer.