Envolvimento do óxido nítrico sobre as alterações comportamentais e moleculares induzidas pela exposição a um estresse intenso: possível efeito do Canabidiol sobre essas respostas

• Processo: 22/00198-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2022
• Data de Término da vigência: 18 de abril de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Neuropsicofarmacologia
• Pesquisador responsável: Francisco Silveira Guimaraes
• Beneficiário: Mariana Gallio Fronza
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/24304-0 - Novas perspectivas no emprego de fármacos que modificam neurotransmissores atípicos no tratamento de transtornos neuropsiquiátricos, AP.TEM
• Assunto(s): Canabidiol Estresse Óxido nítrico Transtornos de estresse pós-traumáticos Psicofarmacologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Canabidiol | estresse | Oxido Nitrico | transtorno de estresse pós-traumático | psicofarmacologia

Resumo

No presente projeto investigaremos se o canabidiol (CBD) poderia intervir favoravelmente nas alterações comportamentais, moleculares e inflamatórios de longo prazo induzidas por exposição de ratos a uma situação de estresse intenso denominada de estresse prolongado único "single prolonged stress" (SPS). Um objetivo complementar da proposta é investigar especificamente se o sistema nitrérgico estaria envolvido nestas alterações, e qual seria o impacto do CBD sobre ele. Ratos Wistar serão submetidos ao SPS, constituído de 2 horas de restrição, seguidas por 20 minutos de natação forçada. Após 15 minutos de descanso, serão colocados em câmara com éter até a perda do tônus postural. Imediatamente após, serão alocados isoladamente. Vinte e quatro horas após, os animais serão submetidos ao teste de preferência pela sacarose (consumo basal será avaliado antes do SPS) e, 7 dias após, ao teste do nado forçado com o intuito de verificar estratégias de enfrentamento ao estresse -coping style. De acordo com a análise dos resultados destes procedimentos os animais serão separados em responsivos ou resilientes ao estresse. O tratamento com CBD se iniciará após a realização do teste de do nado forçado. Serão realizadas injeções diárias de CBD (5mg/kg, i.p., dose baseada em resultados de estudo prévio) por sete dias, sendo que a última injeção será realizada 24h antes do condicionamento. Todos os animais serão submetidos ao condicionamento aversivo ao contexto (MCC). Após 24h, a expressão e a aquisição da resposta de extinção serão avaliadas durante 15 min, na ausência de choques. Para avaliar a consolidação desta memória de extinção, após 24 horas os animais novamente serão expostos à caixa durante 10 minutos. Também serão analisados processos de generalização das respostas de medo em um contexto diferente do contexto de condicionamento por 5 min, 24h após o condicionamento.Para determinar alterações sinápticas relacionadas aos sistemas nitrérgico e glutamatérgico, serão mensurados os níveis (mRNA e proteína) de PSD-95, subunidades do receptor NMDA (GluN1 e GluN2), NF-kB p50/p65 (fração nuclear) e de moléculas do sistema nitrérgico (nNOS, p-nNOS, iNOS, nNOS-AP) em estruturas relacionadas ao PTSD (CPF, hipocampo, amígdala e estriado (controle negativo). Também avaliaremos os níveis de S-nitrosilação e de nitrito e a translocação do GAPDH para o núcleo, e a ativação de fatores pró-apoptóticos e inflamatórios (pela medida dos níveis de p53, Caspase-1, Bax, IL-1², TNF-5ü e IL-6). Finalmente, o envolvimento do óxido nítrico nestas alterações será investigado por abordagens genéticas e farmacológicos.