Desenvolvimento de anticorpos monoclonais humanos para o vírus da influenza a partir da biblioteca de fragmentos Fab

• Processo: 22/00228-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2022
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Ana Maria Moro
• Beneficiário: Kenneth Gabriel Mota
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/07040-1 - Centro de Pesquisa e Desenvolvimento em Imunobiológicos, AP.NPOP
• Assunto(s): Influenza Phage display
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Hai | Influenza | mAbs neutralizantes | phage display | Srag | Produção de anticorpos monoclonais

Resumo

Os vírus causadores da gripe sazonal infectam anualmente entre 5-15% da população mundial, causando por volta de 650 mil mortes/ano. Anualmente há reincidência de epidemias sazonais causadas por Influenza; dados epidemiológicos mostram que no Brasil ocorreram em 2019 29.978 casos de SRAG (Síndrome Respiratória Aguda Grave) e destes, 4.911 casos (16,4%) foram em decorrência da Influenza sazonal. A vacinação necessita de atualização anual para acompanhar a evolução viral. Os pacientes em risco de casos graves poderiam se beneficiar de um tratamento específico, à base de anticorpos monoclonais (mAbs) neutralizantes. MAbs com alta afinidade ao alvo podem neutralizar os vírus no organismo hospedeiro amenizando sintomas graves da doença. MAbs humanos podem ser obtidos pela técnica de phage display, que consiste na apresentação de Fab pelos fagos de uma biblioteca e seleção de mAbs pela ligação a um antígeno. O primeiro mAb humano desenvolvido pela técnica e aprovado pelo FDA (Food and Drug Administration) foi o Adalimumab (Humira®), utilizado como inibidor de TNF-± humano. O objetivo do presente estudo é selecionar, por phage display, fragmentos Fab humanos com potencial neutralizante amplo para diferentes cepas do vírus da influenza. Os antígenos de influenza deste estudo serão provenientes do banco de cepas do Instituto Butantan. Uma biblioteca naïve de Fab construída no laboratório será utilizada para a triagem. A biblioteca será transformada em E. coli XL1-Blue e amplificada, posteriormente será infectada com helper phage para a obtenção de fagos com apresentação de Fab. A biblioteca será enriquecida por sucessivas rodadas de panning pela ligação com o antígeno. Para a seleção de Fabs serão realizados ensaios de Phage ELISA dos clones da biblioteca enriquecida. Os Fabs promissores selecionados das etapas anteriores serão expressos e purificados, para sua caracterização e testes de neutralização. Os Fabs obtidos serão testados quanto a sua afinidade ao antígeno pelo ensaio de ELISA e posteriormente os melhores clones serão submetidos ao ensaio de Western blot para sua caracterização. Ensaios de afinidade dos Fab ao antígeno serão realizados por ressonância plasmônica de superfície. Os Fabs selecionados das etapas anteriores serão avaliados em ensaios de neutralização viral in vitro, pelo ensaio da inibição da hemaglutinação de hemácias (HAI).