Treinamento Técnico em Tecnologias para o Isolamento de Vesículas Extracelulares no Plasma

• Processo: 22/02547-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2022
• Data de Término da vigência: 12 de agosto de 2022
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Iscia Teresinha Lopes Cendes
• Beneficiário: Amanda Donatti
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07559-3 - Instituto Brasileiro de Neurociência e Neurotecnologia - BRAINN, AP.CEPID
• Assunto(s): Acidente vascular cerebral Biomarcadores Análise de sequência de RNA Transcriptômica Vesículas extracelulares Neurociências RNAs não codificadores
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acidente Vascular Cerebral | biomarcadores | RNAs não codificantes | RNA-seq | Transcriptômica | vesículas extracelulares | Neurosciências

Resumo

Biomarcadores são classes de moléculas cujas expressões sofrem alterações de acordo com as condições fisiopatológicas do indivíduo, podendo ser pequenos RNAs não codificantes (ncRNAs), proteínas, metabólitos ou lipídeos. Quando estão circulantes em biofluidos, elas podem estar livres ou presentes em vesículas extracelulares (EVs). Estas, são pequenas vesículas liberadas pelas células em condições fisiológicas específicas e estão diretamente associadas a comunicação e transporte de moléculas intercelular, o que as transforma em potenciais alvos terapêuticos e de diagnóstico de doenças. Assim, o objetivo do nosso trabalho é aperfeiçoar as técnicas para o isolamento de exossomos circulantes no plasma e a obtenção de moléculas que possam ser usadas para estudos em proteômica, metabolômica, lipidômica e transciptômica na identificação de biomarcadores de doenças neurológicas no âmbito dos projetos desenvolvidos atualmente no CEPID-BRAINN. Os exossomos serão purificados do plasma pelo kit qEV Exosome Isolation kit (IZON Science) e método de imunoafinidade com o anticorpo LICAM, para seleção de vesículas provenientes de células cerebrais. As vesículas serão caracterizadas quanto à tamanho, concentração, pureza e conteúdo molecular. Os pequenos ncRNAs serão identificados por sequenciamento de nova geração, utilizando os kits kit QIAseq miRNA Library (Qiagen Inc) e o sequenciador NovaSeq 6000 (Illumina Inc), com análise pelo software DeSeq2 (Bioconductor). O perfil proteômico será identificado por espectrometria de massas em equipamento Orbitrap Q-Exactive HF (ThermoFisher Scientific, Inc). Os dados serão analisados nos softwares MaxQuant e Perseus e comparados com os bancos de dados existentes.