Estabelecimento da edição gênica do miR-21 por CRISPR/Cas9 em modelo in vitro de Carcinoma renal de células claras metastáticas

• Processo: 22/02246-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2023
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Cirurgia
• Pesquisador responsável: Sabrina Thalita dos Reis Faria
• Beneficiário: Caroline Brandão Chiovatto
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Urologia Carcinoma de células renais Expressão gênica Proteína 9 associada à CRISPR Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cancer de rim | Carcinoma Renal de Células Claras | Cas9 | Crispr | miR-21 | Urologia

Resumo

O Carcinoma de Células Renais (CCR) é uma neoplasia maligna, resistente a quimioterapia, que se origina no revestimento do túbulo contorcido proximal dos nefróns. A doença presenta aproximadamente 4% das neoplasias malignas em adultos, e foi classificada em 2018 como o sexto câncer mais mortal mundialmente. O CCR pode ser classificado de acordo com as características genéticas, moleculares e morfológicas distintas e é composto com diferentes subtipos. O CCR de células claras é subtipo mais prevalente e representa cerca de 75% de todos os CCRs. Durante décadas, pacientes com câncer renal, em sua maioria, submetem-se à nefrectomia radical ou parcial, devido as poucas opções de tratamento. Entretanto, os microRNAs (miR) vem se tornando moléculas promissoras para possíveis fins terapêuticos em diversos tipos de câncer. O miR-21 já foi associado ao crescimento celular e a inibição da apoptose em alguns tipos de neoplasias, e em relação ao carcinoma de células renais, já foi demonstrada uma superexpressão desse, sendo ainda mais relevante no tipo células claras onde também já foi associado a um pior prognóstico. Essa molécula possui diversos genes alvos, dentre eles o RECK que possui o poder de influenciar negativamente a MMP-9, uma metaloproteinase responsável por processos carcinogênicos do carcinoma renal de células claras. Pesquisas sugerem que o sistema CRISPR/Cas9 pode ser usado para edição gênica de mamíferos e aplicado à ciência básica, biotecnologia e medicina, considerando que Cas9 é compatível com diferentes espécies. Este sistema é altamente eficiente na introdução de mutações na sequência de miR precursor, levando à perda de expressão e função de interesse. Sendo assim, realizaremos a edição do miR-21 pelo sistema CRISPR/Cas9 em linhagem celular de carcinoma renal de células claras metastáticas e posteriormente, realizaremos a análise dos genes alvos citados (RECK/MMP-9). Desta forma, considerando o papel efetivo dos miRNAs sobre a regulação da expressão gênica, este estudo pioneiro pode contribuir para o uso destas moléculas na era da medicina de precisão do câncer de rim, abrindo uma perspectiva de estudo que poderão no futuro favorecer o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas.(AU)