Detecção e análise dos mecanismos de geração de oxigênio singlete em leucócitos

• Processo: 21/08842-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2022
• Vigência (Término): 31 de julho de 2026
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Graziella Eliza Ronsein
• Beneficiário: Rafaela Oliveira Nascimento
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07937-8 - Redoxoma, AP.CEPID
• Assunto(s): Oxigênio singleto Eosinófilos Leucócitos Neutrófilos Metionina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ácidos hipohalosos | eosinófilos | Haloaminas | leucócitos | neutrófilos | Oxigênio Singlete | Mecanismos de oxigênio singlete em meio biológico

Resumo

Neutrófilos e eosinófilos são leucócitos essenciais para o sistema imune. Os neutrófilos são as primeiras células a serem recrutadas para os sítios inflamatórios e são capazes de orquestrar a resposta imune. Os eosinófilos também eliminam patógenos, porém principalmente fungos e protozoários. Eles estão associados a doenças como Asma, Rinite e doenças gastrointestinais. Tanto eosinófilos como neutrófilos possuem diversos mecanismos de defesa que podem envolver a formação de espécies reativas de oxigênio. Uma das espécies possivelmente envolvida nesse mecanismo é o oxigênio singlete (1O2). Essa molécula é um potente oxidante em meio biológico, porém sua presença e mecanismos de formação em leucócitos ainda é contraditória. Desta forma, esse projeto de doutorado tem como objetivos 1) analisar a geração de 1O2 em leucócitos ativados. Para a realização dos experimentos serão utilizados modelos celulares de neutrófilos (HL-60) e eosinófilos (EoL-1). Os resultados serão confirmados utilizando neutrófilos e eosinófilos isolados de sangue periférico humano; 2) investigar o papel de diferentes espécies reativas presentes em leucócitos na formação de 1O2, como por exemplo, reações envolvendo haloaminas. Para detecção da presença de 1O2, serão utilizados métodos de análise altamente específicos, através do monitoramento de luz na região no infravermelho próximo e também com captação química a partir do antraceno- 9,10-divinilsulfonato (AVS) com análise por HPLC/MS/MS; 3) resultados anteriores obtidos em iniciação científica indicaram, a partir de análises por HPLC/MS/MS, que a oxidação de metionina por oxidantes presentes em leucócitos (HOCl, HOBr e 1O2) pode gerar produtos específicos relacionados a presença desses oxidantes nas células. A partir dos resultados promissores, deseja-se analisar os mecanismos de reação de peptídeos e proteínas contendo metionina no N-terminal, para identificação de produtos que atuem como assinaturas específicas de oxidantes em leucócitos. (AU)