Estudos pré-clínicos sobre o potencial anticárie do extrato aquoso de Malva sylvestris: avaliação da composição, pigmentação dentária e citotoxicidade assim como dos efeitos antimicrobiano e na desmineralização in vitro e in situ

• Processo: 21/13664-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Vigência (Início): 01 de agosto de 2022
• Vigência (Término): 31 de julho de 2024
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Odontologia Social e Preventiva
• Pesquisador responsável: Ana Carolina Magalhães
• Beneficiário: Aline Silva Braga
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB). Universidade de São Paulo (USP). Bauru , SP, Brasil
• Assunto(s): Cárie dentária Dentina Fibroblastos Esmalte dentário Pigmentação Desmineralização do dente Anti-infecciosos Malva sylvestris Biofilmes Fitoterapia Microbiota Citotoxicidade
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biofilme | Cárie Dentária | fitoterapia | Metaboloma | Microbioma | Cárie dentária

Resumo

O objetivo desta proposta será avaliar o potencial antimicrobiano, antibiofilme e anticárie do extrato de Malva sylvestris em esmalte e dentina, bem como sua composição química, capacidade em alterar a cor do esmalte dentário e a citotoxicidade em fibroblastos humanos. Para isso, a proposta será realizada em duas etapas, a seguir: A) Fase in vitro: Perfil químico do extrato comercial de Malva sylvestris por UPLC-HRMS; Determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) em microrganismos em fase planctônica (Streptococcus mutans, Lactobacillus casei, Candida albicans); Formação de biofilme microcosmo a partir da saliva humana sobre amostras de esmalte e dentina bovina, para avaliar os microrganismos presentes após os tratamentos realizados com as seguintes soluções experimentais: 1. Malva sylvestris pura (50%); 2. Malva sylvestris pura (50%) + 5% xilitol; 3. Malva sylvestris pura (50%) + 5% xilitol + Flúor (NaF, 225 ppm F); 4. 5% Xilitol; 5. Fluoreto (NaF, 225 ppm F); 6. Malvatricin Plus® (Controle positivo 2); 7. PerioGard® (controle positivo 1); 8. PBS (controle negativo); 9. Álcool-etanol 50% (controle negativo). O efeito anti-biofilme será avaliado por Contagem das Unidade Formadoras de Colônias (Log10CFU/mL) e sequenciamento do gene 16S rRNA através Illumina MiSeq para a análise do Microbioma; os metabólitos bacterianos formados serão analisados por UPLC-HRMS; já a lesão cariosa será mensurada por Microradiografia Transversal (TMR). Ainda haverá a análise da alteração de cor no esmalte dentário usando um espectrofotômetro digital (Vita Easyshade®) e do efeito citotóxico em fibroblastos humanos por análise de redução do MTT e microscopia confocal; B) Fase in situ: será realizado um estudo duplo-cego e cruzado envolvendo 15 participantes que utilizarão aparelho palatino contendo 4 blocos de dentes bovinos (2 de esmalte e 2 de dentina radicular) protegidos por malha, durante 7 dias, com 6 aplicações de sacarose a 30% todos os dias; os tratamentos serão realizados em três fases distintas para as seguintes soluções 1) A melhor solução contendo Malva sylvestris determinada na 1a fase do estudo; 2) Solução contendo fluoreto (225 ppm); e 3) Solução placebo (água deionizada) (v= 10 mL, 2x/dia/1 minuto). Após os 7 dias, o biofilme de dois blocos será removido e armazenado para análise dos microrganismos por UFC, enquanto o biofilme dos outros dois blocos serão transferidos para solução protetora (DNA/RNA shield, Zymo®) e armazenada até o sequenciamento do gene 16S rRNA através Illumina MiSeq, assim como os metabolitos por UPLC-HRMS. As lesões dentárias serão avaliadas por TMR. Os dados serão tabulados e submetidos à análise estatística utilizando programas Graph Pad Software (San Diego, EUA). Verificar-se-á se os dados apresentam distribuição normal e se são homogêneos. Após esta verificação será aplicado o teste estatístico mais adequado, paramétrico ou não paramétrico, para a comparação entre os diferentes tratamentos. O nível de significância adotado em todos os testes será de 5%. (AU)