Efeitos de diferentes ácidos graxos na competência de células trofoblásticas e embriões bovinos estabelecerem com sucesso a prenhez.

• Processo: 22/08652-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Claudia Maria Bertan Membrive
• Beneficiário: Valeska de Castro Lourenço
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Tecnológicas. Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Dracena. Dracena , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/01110-3 - Efeitos de diferentes ácidos graxos na competência de células trofoblásticas e embriões bovinos estabelecerem com sucesso a prenhez, AP.R
• Assunto(s): Embrião Ácido linoleico Ácido oleico Ácidos graxos ômega-3
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Embryo | linoleic acid | Oleic acid | ômega 3 | prostaglandins | Trophoblast | Fisiologia da reprodução de fêmeas bovinas

Resumo

A prostaglandina E2 (PGE2) sintetizada no endométrio materno, embrião e células trofoblásticas (CT) apresenta efeitos luteotróficos e anti-luteolíticos; favorecendo o reconhecimento materno fetal. A síntese de prostaglandina F2a (PGF2a) e PGE2 em tecido endometrial e células endometriais foi exaustivamente estudada, entretanto, tal síntese em CT e embriões foi pobremente perseguida e compreendida. O uso de diferentes ácidos graxos (AG) pode alterar a proporção de PGE2 e PGF2a sintetizadas nas CT e embriões. Algumas estratégias utilizando os AG poliinsaturados n-6, ácido linoleico conjugado (CLA) ou não (AL), vem sendo investigadas por este grupo (Processos FAPESP 2016/02805-4 e 2018/24168-1). Em um estudo recente realizado pelo grupo (Processo FAPESP 2018/24168-1), testou-se os efeitos do tratamento com CLA [cis-9, trans-11 (c9, t11) e trans-10, cis-12 (t10, c12)], em diferentes doses no meio de cultivo das CT1. Verificou-se a redução na síntese de PGF2a em todos os grupos tratados com CLA (10, 20, 50 e 100 µM) com 24, 48 e 72 horas de cultivo comparado ao controle (0 µM). Também foi observada maior relação PGE2/PGF2a em todos os grupos tratados com CLA comparado ao controle; tendo também havido modificações na abundância de transcritos envolvidos na biossíntese de PGF2a e PGE2. Nesse estudo, diferentes doses de CLA também foram utilizadas na produção in vitro de embriões, durante a maturação e cultivo in vitro (MIV e CIV) ou somente no cultivo in vitro (CIV). Evidenciamos que as doses de 50 e 100 uM no CIV aumentou a produção de blastocistos eclodidos no D9. Dentre os efeitos positivos nos embriões, em estudos recentes, sugere-se a redução do estresse oxidativo e a melhoria no nível de metilação do DNA. Diante dos resultados promissores obtidos até o momento (Processo FAPESP 2018/24168-1), encaminhamos a referida proposta com o objetivo de prosseguir com o referido estudo, testando nos mesmos modelos biológicos (CT1 e embriões produzidos in vitro) outros tipos de ácidos graxos, especialmente o ácido linoleico não conjugado (AL; C18:26; ômega 6), ácido oleico (AO; C18:1; ômega 9) e uma mistura contendo ácido eicosapentanóico (EPA; 20:53; ômega 3) + docosahexanóico (DHA; 22:63; ômega 3). Na referida proposta além das análises validadas, mensuração das concentrações de PGF2± e PGE2 por ELISA e expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanóides em CT1 e embriões; pretendemos expandir as investigações nos embriões quanto à distribuição dos lipídios, efeitos na redução do estresse oxidativo e alterações na metilação do DNA. A hipótese desse estudo é que a suplementação com CLA, AL, AO ou EPA + DHA aumenta a relação PGE2/PGF2a e modifica a expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanóides e no reconhecimento materno fetal em CT1 e embriões bovinos, além de alterar à distribuição dos lipídios, diminuir o estresse oxidativo e favorecer o nível de metilação do DNA nos embriões. Assim, tornam-se objetivos avaliar os efeitos da suplementação com CLA, AL, AO ou EPA + DHA na relação PGE2/PGF2± e na expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de prostaglandinas (PTGER2, PTGER4, PTGES1, PLA2G10, PTGS2, PTGES2, AKR1B1, AKR1C4) e no reconhecimento materno-fetal (IFNT) em CT1 (Experimento 1); comparar os efeitos da suplementação com CLA, AL, AO ou EPA + DHA no CIV na relação PGE2/PGF2a, na expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de prostaglandinas (PTGER2, PTGER4, PTGES1, PLA2G10, PTGS2, PTGES2, AKR1B1, AKR1C4), no reconhecimento matermo-fetal (IFNT) e no nível de metilação do DNA (DNMT1, DNMT3A, DNMT3B) em embriões bovinos produzidos in vitro no D7 (Experimento 2); avaliar os efeitos da suplementação com CLA, AL, AO ou EPA + DHA, na MIV + CIV ou somente CIV, na distribuição lipídica e no estresse oxidativo (mensuração de espécies reativas de oxigênio, potencial de membrana mitocondrial e nível intracelular do antioxidante glutationa) em embriões produzidos in vitro no D7 (Experimento 3).