Construção de uma nova ferramenta de inserção de genes no cromossomo de Proteus mirabilis: mini-ICE

• Processo: 22/05325-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rodrigo da Silva Galhardo
• Beneficiário: Giovanna Moraes da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Engenharia genética Edição de RNA Transferência genética horizontal Proteus mirabilis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: edição gênica | elementos integrativos conjugativos | genética | Ice | Proteus mirabilis | Transferência horizontal de genes

Resumo

Mecanismos de inserção de genes no cromossomo são eficazes para a engenharia genética e ideais para integração de DNA em situações em que a seleção de plasmídeos é inviável, como em cepas vacinais ou destinadas à liberação ambiental. A criação de novos mecanismos de inserção de genes no cromossomo é importante para expandir a gama de sistemas de expressão gênica, alcançado novas espécies bacterianas, e também para utilização de diferentes mecanismos em conjunto. Este projeto propõe o uso de elementos integrativos conjugativos (ICEs) para a construção de um novo mecanismo de entrega de genes no cromossomo em sítio específico, o mini-ICE. O mini-ICE é composto por fragmentos de DNA que garantem: um sítio de inserção do ICE, um sítio de clonagem múltipla e sítios para enzimas Flip recombinase. Os sítios da enzima Flip recombinase flanqueiam genes de resistência a cloranfenicol, origem de replicação, origem de transferência e genes que codificam a enzima integrase. O mini-ICE será testado em Proteus mirabilis e, posteriormente, em outras bactérias de interesse.(AU)