Avaliação da disposição espacial do colesterol pela filipina em diferentes estados da capacitação espermática de bovinos

• Processo: 22/12878-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Vigência (Início): 01 de dezembro de 2022
• Vigência (Término): 30 de novembro de 2023
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Eneiva Carla Carvalho Celeghini
• Beneficiário: Gabriel de Miranda Teodoro Soares
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Bovinos Capacitação Colesterol Fluorescência Microscopia Filipina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovinos | capacitação | colesterol | filipina | fluorescência | microscopia | Andrologia Animal

Resumo

Os espermatozoides devem passar por uma série de eventos bioquímicos, durante o transporte através do trato reprodutivo da fêmea, a fim de serem capazes de fertilizar o oócito. Estes eventos culminam com modificações espermáticas que caracterizam a capacitação espermática; em vista da importância deste evento para a fertilização do oócito, surge, portanto, a necessidade de novas formas de avaliação espermática que possam detectar estes eventos e relacioná-los com o potencial de fertilidade do sêmen. Uma das etapas da capacitação é a depleção do colesterol da membrana plasmática e a redistribuição do colesterol remanescente da região equatorial para apical, formando as balsas lipídicas. Os objetivos deste trabalho são propor um protocolo para sêmen bovino com o uso da Filipina para avaliar a disposição espacial do colesterol em diferentes etapas da capacitação espermática, e avaliar as alterações da disposição destas moléculas após a criopreservação. Serão utilizados três ejaculados de quatro touros da raça Nelore (n=12). Cada ejaculado será submetido a análises convencionais (motilidade, vigor, concentração e morfologia) e em seguida o sêmen será distribuído em quatro tratamentos: 1. in natura (IN), espermatozoides não capacitados; 2. indução da capacitação espermática por uma duas horas e 30 minutos (MT, metade do tempo da indução total); 3. indução da capacitação espermática por cinco horas (CP, tempo completo de indução); 4. pós-criopreservação (CR). Após os tratamentos, todas as amostras serão avaliadas quanto à disposição do colesterol utilizando a sonda fluorescente Filipina e quanto à reação acrossomal utilizando FITC-PSA. Os dados serão submetidos à ANOVA e análise de regressão linear, considerando o nível de significância de 5%. Espera-se que na amostra IN seja observada a distribuição normal das moléculas de colesterol sobre a membrana plasmática (controle), e que após a metade do tempo de indução da capacitação (2,5h), na amostra MT, seja encontrado um rearranjo das moléculas de colesterol, após o tempo completo de indução da capacitação (5h), na amostra CP, tenha ocorrido a depleção do colesterol; em adição, na amostra pós-criopreservação (CR) espera-se encontrar uma desorganização das moléculas de colesterol em função das lesões causadas pela criopreservação.