Avaliação da toxicidade hepática aguda e inflamação induzida por nitrosaminas em Mus musculus e Danio rerio

• Processo: 22/04772-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Interdisciplinar
• Pesquisador responsável: Marcos Hikari Toyama
• Beneficiário: Isabelly Annunciato
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB-CLP). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus Experimental do Litoral Paulista. São Vicente , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 23/01973-4 - Estudo por dinâmica molecular da interação entre as nitrosaminas e a proteína PAF-AH plasmática acoplada a membrana lipossomal, BE.EP.MS
• Assunto(s): Mus musculus Toxicologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: acute inflammation | Danio | liver function | Mus musculus | Nitrosamines | Toxicologia

Resumo

As nitrosaminas são compostos classificados como contaminantes emergentes, carcinogênicos e oxidantes. Podem alterar as propriedades das membranas celulares e induzir um aumento dos lípidos biologicamente ativos, como o ácido araquidónico e o PAF, um potente agente pró-inflamatório capaz de induzir o aparecimento de doenças hepáticas. Neste trabalho, utilizaremos duas nitrosaminas (N-Nitrosodietilamina e N-Nitrosodimetilamina), escolhidas por serem as mais encontradas comercialmente, para induzir inflamação e hepatotoxicidade aguda em espécimes de Mus musculos, estas serão expostas a diferentes concentrações de cada uma das nitrosaminas, para realizar análises bioquímicas, histológicas e hematológicas subsequentes que mostrarão possíveis danos hepáticos induzidos pela exposição a estes contaminantes. Amostras do sangue dos camundongos serão coletadas, e subsequentemente, o fígado será submetido a uma avaliação histológica. Uma alíquota da reserva de sangue coletada dos grupos expostos e não expostos a nitrosaminas será submetida a análise hematológica, utilizando técnicas de esfregaço e subsequente contagem de células em câmara Neubauer. Outra alíquota será utilizada para análise bioquímica da desidrogenase láctica, transaminase oxalacetica (TGO), transaminase pirúvica (TGP), gama-glutamil transferase (GGT), e proteína C reactiva, para monitorar possíveis alterações hepáticas. Além disso, avaliaremos os níveis de interleucina 6 (IL-6), o fator de necrose tumoral alfa (TNF alfa), os níveis de malondialdeído (MDA), e a enzima fosfolipase A2 associada a lipoproteína (Lp-PLA2), também conhecida como fator de ativação plaquetária acetil-hidrolase (PAF-AH), pois esta é crucial no processo de controle da inflamação, sendo considerada uma proteína anti-inflamatória, uma vez que a PAF-AH atua regulando os níveis plasmáticos do fator de ativação plaquetária (PAF), um fator lipídico extremamente importante na progressão e desenvolvimento do processo inflamatório. Assim, o presente projeto visa mostrar que as nitrosaminas são agentes que podem induzir disfunção hepatocitária, que podem afetar o metabolismo energético e que o fator de ativação plaquetária (PAF) seria um importante agente causador de hepatotoxicidade. Para além destas investigações in vivo e bioquímicas, utilizaremos técnicas de acoplamento molecular que serão feitas no nosso laboratório e dinâmica molecular, estas serão feitas na BioSIM (Universidade do Porto) para investigar a capacidade das nitrosaminas como potencial inibidor não selectivo das enzimas LPCAT e PAF-AH. Uma vez que a nitrosamina é um composto comum produzido em ambientes aquáticos, também realizaremos ensaio de CL50% dos compostos e monitoração de modificações hematológicas e histológicas hepáticas induzidas por ambos os compostos no peixe Danio rerio.