Estabelecimento de linhagem celular suína transgênica com potencial de escape imunológico para xenotransplante em humanos

• Processo: 22/15222-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2022
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
• Pesquisador responsável: Silvano Mario Attilio Raia
• Beneficiário: Túlio Teruo Yoshinaga
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11872-5 - Centro de Ciência para o Desenvolvimento em Xenotransplante, AP.CCD
• Assunto(s): Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Engenharia genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Crispr | Edição Genética | transgene | xenotransplante | Engenharia Genética

Resumo

O xenotransplante vem alcançando grandes progressos nos últimos anos, sobretudo após oaperfeiçoamento das tecnologias de manipulação gênica. Nesse contexto, a utilização de porcinos como fontedoadora de órgãos tem ganhado destaque devido às vantagens reprodutivas e às semelhanças anatômicas efisiológicas com primatas. Entretanto, apesar dos benefícios propiciados pelo modelo suíno, o transplante deórgãos para humanos enfrenta complexas barreiras imunológicas. Esse cenário é composto por cascatas deresposta imune inata e adaptativa, somadas a disfunções da coagulação e processos inflamatórios que, emdiferentes níveis, envolvem o recrutamento de anticorpos naturais, ativação de linfócitos T, células NK emacrófagos. Dentre os fatores que sinalizam nas vias de rejeição do órgão, destacam-se o PDL1 e o CD47,atuantes na regulação da resposta imune celular, o CD46, modulador do sistema complemento, a HO-1 e a TBM,proteínas envolvidas nos processos de inflamação e coagulação. Ensaios in vitro e in vivo demonstraram que aexpressão transgênica desses genes humanos em porcos conferiu menor imunogenicidade e maior proteçãoimunológica aos órgãos transplantados. Com o uso do sistema de eletroporação Neon, o presente trabalho irátransfectar vetores do transposon piggyBac contendo as ORFs dos genes humanos supracitados em célulasprimárias endoteliais da aorta suína editadas com nocaute dos genes GGTA1, BGalNT2 e CMAH. A confirmaçãodos knock-ins bem como a análise da expressão e a seleção das células editadas serão realizadas porsequenciamento do genoma, citometria de fluxo, RT-qPCR e Western Blotting. Assim, espera-se estabelecer umalinhagem celular com características de um potencial modelo capaz de superar as principais barreiras imunes queinviabilizam o xenotransplante