Plasticidade, distribuição e dinâmica de ionócitos e cardiomiócitos: mecanismos fisiológicos de ajuste acontaminação ambiental em diferentes ambientes aquáticos

• Processo: 22/14646-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Comparada
• Pesquisador responsável: Marisa Narciso Fernandes
• Beneficiário: Anieli Cristina Maraschi
• Instituição Sede: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/08491-0 - Material particulado atmosférico e contaminação ambiental. Avaliação do impacto na biota aquática em uma abordagem ecofisiotoxicológica integrada, AP.TEM
• Assunto(s): Miócitos cardíacos Homeostase Metais Nanopartículas metálicas Vertebrados Toxicologia Poluição ambiental Ambiente aquático
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cardiomiócitos | Homeostase | ionócitos | Metais | nanopartículas metálicas | vertebrados | Ecofisiotoxicologia

Resumo

A ação do material particulado atmosférico (MPA) oriundo de indústria siderúrgicas será avaliada em: (1) tilápia-do-Nilo (Oreochromis niloticus), uma espécie eurialina, de interesse comercial, cujos parâmetros fisiológicos e bioquímicos são bem conhecidos; (2) uma espécie topo-de-cadeia, o robalo (Centropomus parallelus), indicadorados efeitos reais no ambiente estuarino. Exemplares de cada espécie de peixe serão expostos a pelo menos 2 concentrações de MPA (grupos MPA) a serem determinadas e respectivos grupos controles (grupos C), mantidos em água sem adição de MPA. Após exposição tecidos com alta concentração de ionócitos (brânquias e rins) serão removidos e processados de acordo com a técnica a ser utilizada para a determinação das proteínas de transporte iônico (Na+ /K+-ATPase, H-ATPase, cotransportador Na+/K+/2Cl-, canais de cloreto) por imunohistoquímica (Dang et al., 2000; McCormick et al., 2003) e será avaliada a distribuição dessas células em cada um dos órgãos analisados em microscópio de fluorescência e confocal. A plasticidade e dinâmica dos diferentes tipos de ionócitos será avaliado em relação ao ambiente e nível de contaminação. Em relação aos cardiomiócitos (coração), a ação do MPA será avaliada em relação a contratilidade miocárdica através da análise da expressão de proteínas envolvidas no acoplamento excitação-contração e manejo intracelular do Ca2+. A expressão das proteínas Ca2+-APTase do retículo sarcoplasmático (SERCA), fosfolambano (PLB), trocador Na+/Ca2+ (NCX) e canal de Ca2+ tipo L (LTCC) será analisada por Western blot. Após eletroforese das amostras deproteínas em gel de SDS-poliacrilamida seguida de transferência elétrica para uma membrana de fluoreto depolividileno (PVDF) e bloqueio das proteínas as membranas serão incubadas overnight a 4°C com os anticorposprimários: anticorpo policlonal de coelho anti-SERCA (Abcam Plc, Cambridge, UK); anticorpo monoclonal de camundongo anti-PLB (Millipore Corporation, Billerica, MA); anticorpo monoclonal de coelho anti-NCX (Abcam Plc,Cambridge, UK); anticorpo monoclonal de camundongo anti-LTCC (Abcam Plc, Cambridge, UK) diluídos em uma solução de BSA 5% em um tampão TBS-T. Posteriormente, as membranas serão incubadas com os anticorpos secundários conjugados com fosfatase alcalina: anti-coellho IgG (Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA) e anti-camundongo IgG (Millipore Corporation, Billerica, MA). As membranas serão digitalizadas, as bandas serão analisadas por densitometria no software ImageJ e os resultados serão expressos em unidades arbitrárias (U.A.) de densidade óptica normalizadas pela quantidade de GADPH (Santa Cruz Biotechnology Inc., CA, USA) detectado nas respectivas amostras. (AU)