Transfecção de vesículas extracelulares do fluido folicular com microRNAs específicos: uma forma de miRNA delivery para células do complexo cumulus-oócito de bovinos

• Processo: 22/09461-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2023
• Data de Término da vigência: 26 de agosto de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Juliano Coelho da Silveira
• Beneficiário: Camila Azzolin de Souza
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/06645-0 - Vesículas extracelulares como uma plataforma para diagnóstico e manipulação do sistema de produção in vitro de embriões: a nova geração da reprodução animal, AP.JP2
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/07395-5 - Suplementação com miRNAs específicos durante o desenvolvimento embrionário inicial: uma ferramenta para melhorar a produção in vitro de embriões, BE.EP.MS
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Delivery para células do complexo cumulus oócito | Ferramenta para incrementar as taxas de PIV | Produção in vitro de embriões (PIVE) | Suplementação de CCOs com vesículas extracelulares | Transfectação de miRNA | Vesículas extracelulares presente no fluido folicular | Biologia Básica

Resumo

Biotécnias reprodutivas como a produção in vitro de embriões aceleram o melhoramento genético, porém o sucesso da mesma está diretamente ligado com a capacidade de mimetizar o ambiente in vivo. Dentre os eventos que ocorrem durante a maturação folicular e crescimento oocitário está a comunicação intercelular no ambiente folicular e consequentemente a transferência de biomoléculas entre as células somáticas e entre as células somática e gaméticas. A transferência dessas moléculas é facilitada pelo fluido folicular presente no antro folicular. O fluido folicular fornece um importante microambiente para o crescimento folicular e maturação do oócito, uma vez que contêm, dentre outros componentes, vesículas extracelulares (EVs). EVs são nanopartículas que contêm diversas moléculas biológicas, tais como o microRNAs, que podem modular a função das células receptoras. Portanto, a hipótese do presente estudo é que vesículas extracelulares do fluido folicular podem ser carregadas com miRNAs específicos e são capazes de entregar esses miRNAs para as células do cúmulus in vitro. Dessa forma, os objetivos são 1) isolar e transfectar vesículas extracelulares do fluido folicular com miRNAs, 2) verificar a eficiência de transfecção dos miRNAs, 3) determinar a eficiência de entrega de miRNAs, 4) determinar os efeitos moleculares da suplementação de CCOs bovinos com vesículas extracelulares contendo miRNAs de interesse e 5) avaliar as taxas de maturação e produção de embriões de CCOs suplementados com vesículas extracelulares contendo miRNAs de interesse. Esperamos demonstrar o sucesso da transfecção de vesículas extracelulares com miRNAs específicos assim como a sua entrega para as células do cumulus. Os resultados do nosso estudo são de fundamental importância para preencher lacunas da biologia reprodutiva, da mesma maneira que se apresenta como uma potencial ferramenta para incrementar as taxas de produção in vitro de embriões.