Caracterização da interação de novas proteínas com o exossomo

• Processo: 22/16359-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carla Columbano de Oliveira
• Beneficiário: Rebeca Barcelos Jantsch
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/00901-1 - Controle pós-transcricional de expressão gênica: processamento de pré-rRNA, degradação de mRNA, splicing e montagem de snoRNPs em Saccharomyces cerevisiae, AP.TEM
• Assunto(s): Caracterização Exossomos Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caracterização | co-imunoprecipitação | exossomo | expressão gênica | mutantes fosfomiméticos | Ylr257W | Ylr363W-A | Exossomo

Resumo

O RNA exossomo é um complexo ribonucleolítico formado pela associação de diversassubunidades. Devido a sua atividade catalítica de exoribonuclease 3'à5', o exossomo controlaos níveis de RNAs de todos as classes, de modo a regular a estrutura da cromatina, regular aexpressão gênica, atuar na diferenciação celular e ser fundamental no processo de biogênesedo ribossomo. Nesse contexto, essa RNase tem sido foco central de pesquisas no Laboratóriode Controle Pós-Transcricional de Expressão Gênica (LCPTEG) da USP. Para seu completofuncionamento, o exossomo necessita de cofatores que atuam tanto diretamente na atividadecatalítica quanto no direcionamento do complexo para os substratos. Todavia, os mecanismosenvolvidos nesses processos ainda não foram plenamente elucidados. Diante disso, diversosestudos indicam que a fosforilação das subunidades do exossomo e dos complexos proteicosque auxiliam sua atividade é fundamental na regulação da sinalização entre os componentes doexossomo e do substrato. Assim, este projeto tem como objetivo a caracterização dasfosfoproteínas YLR257W e YLR363W-A, que em estudos prévios do nosso laboratóriodemonstraram estarem fosforiladas quando purificadas com o exossomo. Para isso, serãorealizados ensaios de co-imunoprecipitação com ambas as proteínas de Saccharomycescerevisiae e a identificação das proteínas será realizada por espectrometria de massas. Essasabordagens demonstram potencial para gerar resultados inéditos e identificar proteínas aindanão relatadas interagindo com o exossomo, bem como analisar seus papéis no funcionamentocelular. Dada a conservação evolutiva destes processos em eucariotos, esses resultados poderãoser extrapolados para humanos, nos quais doenças já foram identificadas como sendo causadaspor mutações nos genes das proteínas homólogas estudadas por este grupo de pesquisa.