Análise comparativa de modelos animais de distrofia muscular - Histopatologia, localização de células satélites musculares e testes de força

• Processo: 22/14114-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Vigência (Início): 01 de março de 2023
• Vigência (Término): 31 de maio de 2023
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Mayana Zatz
• Beneficiário: Antonio Fernando Ribeiro Júnior
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/08028-1 - CEGH-CEL - Centro de Estudos do Genoma Humano e de Células-Tronco, AP.CEPID
• Assunto(s): Distrofia muscular Distrofia muscular de Duchenne Modelos animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Distrofia Muscular | Distrofia Muscular de Duchenne | genética humana | modelos animais | Estudo de Modelos Animais

Resumo

Os modelos animais são uma importante ferramenta para o estudo de doenças genéticas. O CEGH-CEL possui alguns modelos animais muito interessantes para o estudo da Distrofia Muscular de Duchenne (DMD), que acomete seres humanos. A DMD é uma doença degenerativa progressiva muito grave, causada por mutações no gene da distrofina que levam a uma perda total desta proteína nos músculos esqueléticos do indivíduo. No caso dos modelos animais, ocorre o mesmo, mas o fenótipo observado pode ser leve, moderado ou grave. Os modelos animais sem distrofina presentes no CEGH-CEL são: camundongo DMDmdx, camundongo D2mdx, camundongo mdx/utrn-/- (dko) e cão GRMD (do inglês, Golden Retriever Muscular Dystrophy). O objetivo principal vinculado a esta bolsa TT-4 é caracterizar (em nível molecular, proteico e histológico) diferentes linhagens de modelos animais de DMD. Primeiramente, as colônias de camundongos serão ampliadas a fim de aumentar a quantidade de animais disponíveis para estudo. Assim que disponíveis, um macho e uma fêmea de cada linhagem serão eutanasiados em diferentes idades (1, 2, 3, 4, 5 e 6 meses) e seus músculos e corações serão coletados. O material coletado será devidamente preparado para a realização de análises de expressão gênica, expressão proteica e histopatológicas. O objetivo destas análises é comparar as diferentes linhagens murinas entre si e em relação a linhagem controle, que não possui nenhuma alteração genética. Serão analisados genes e proteínas que atuam na via de degeneração e regeneração muscular e que são essenciais às células-tronco musculares, também denominadas células satélites (cs), que são de extrema importância no processo de regeneração do músculo esquelético. Pretendemos analisar comparativamente a presença destas células no músculo destes animais e investigar se as mesmas se encontram ativadas ou quiescentes. Outros parâmetros histopatológicos devem ser analisados, como deposição de colágeno, que nos permite avaliar o avanço do processo distrófico com substituição de fibras musculares por fibrose, e análise quantitativa de fibras musculares em processo de regeneração. A caracterização funcional destas linhagens murinas será feita através da avaliação motora, de força e resistência muscular, utilizando técnicas previamente estabelecidas e publicadas pelo TREAT-NMD. Para a caracterização histopatológica dos cães GRMD, serão analisadas biópsias musculares de 6 cães (5 distróficos e 1 normal) de mesma idade. Estas biópsias foram obtidas aos 5 meses, 1 ano e 5 anos de vida, o que nos permitirá avaliar a progressão da doença e como ela reflete no comportamento das células satélite. Assim como nos camundongos, avaliaremos genes e proteínas relacionadas à degeneração e regeneração muscular e às CS. Todas as análises propostas no trabalho serão realizadas utilizando os mais rigorosos critérios científicos e técnicas já bem estabelecidas e amplamente difundidas.