Avaliação do panorama de acilações pós-traducional de histonas causadas por ácidos graxos de cadeia curta no intestino

• Processo: 23/10157-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Vigência (Início): 01 de novembro de 2023
• Vigência (Término): 31 de outubro de 2024
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunogenética
• Pesquisador responsável: Patrick Daniel Varga-Weisz
• Beneficiário: Dieggo Rodrigues de Paula
• Supervisor: Tiziana Bonaldi
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Local de pesquisa: Istituto Europeo di Oncologia (IEO), Itália
• Vinculado à bolsa: 21/00398-0 - Interação entre a microbiota e modificações de histonas no intestino saudável, BP.DD
• Assunto(s): Cólon Espectrometria de massas Histonas Organoides
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cecum | Cólon | Espectrometria de massas | histonas | Organóides | Silac | Interação microbiota-hospedeiro

Resumo

Os ácidos graxos de cadeia curta (SCFA) produzidos pela microbiota atuam de várias maneiras nas células epiteliais do intestino para regular a expressão gênica e têm sido associados ao estado metabólico das células. As modificações pós-traducionais de histonas (hPTM) ganharam destaque com o desenvolvimento de tecnologias baseadas em espectrometria de massa (MS) e a descoberta de acilações não clássicas, como crotonilação, butirilação e propionilação. No entanto, falta uma determinação abrangente e detalhada de como essas hPTMs no intestino estão ligados aos SCFAs. Este projeto propõe o uso de cultura organoide do ceco e cólon usando marcação de isótopos estáveis por aminoácidos em cultura celular (SILAC) para identificação e quantificação de padrões complexos de acilações pós-traducionais de histonas em células epiteliais intestinais tratadas com crotonato e butirato usando MS. Além disso, para aumentar a precisão da identificação e quantificação in vivo de hPTMs pelo método super-SILAC, as células obtidas do cultivo de organoides serão utilizadas como um padrão interno spike-in para os tecidos de cólon e ceco, obtendo assim um background de acilação semelhante à linha de base encontrada nas células epiteliais intestinais de cada órgão como controle. Além disso, os animais serão tratados com antibióticos para depleção aguda da microbiota e o panorama de acilações in vivo será caracterizado. Com base nos dados do MS, espera-se que as modificações das histonas estejam associadas a funções específicas nas células epiteliais que podem ser validadas por imunoprecipitação da cromatina (ChIP). Finalmente, esses dados podem fornecer a base mecanística para o controle da expressão gênica pela microbiota via SCFA nas células epiteliais do intestino e seu papel na homeostase. (AU)