Efeito de heme na expressão de mediadores inflamatórios nas células HMEC-1

• Processo: 23/09206-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Nicola Amanda Conran Zorzetto
• Beneficiário: Vanessa Figueiredo Alberto
• Instituição Sede: Centro de Hematologia e Hemoterapia (HEMOCENTRO). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/18886-1 - Mecanismos fisiopatológicos e tratamento das anormalidades das células vermelhas do sangue, AP.TEM
• Assunto(s): Anemia falciforme Citocinas Endotélio Heme Hemólise Inflamassomos Hemoterapia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anemia falciforme | citocina | endotélio | heme | hemólise | inflamassoma | Hemoterapia

Resumo

A anemia falciforme (AF) é uma doença genética caracterizada pela deformação das hemácias devido a uma polimerização da hemoglobina S anormal. As manifestações clínicas estão relacionadas principalmente aos processos vaso-oclusivos, como crises dolorosas e complicações em diversos órgãos. Na doença ocorre uma extensa hemólise intravascular devido a fragilidade das hemácias. A liberação de hemoglobina e o grupo heme das hemácias na circulação causa uma resposta inflamatória vascular que contribui para o desencadeamento dos processos de vaso-oclusão na microcirculação envolvendo células endoteliais (CE), hemácias, leucócitos, plaquetas e proteínas do plasma. Este projeto tem como objetivo determinar o efeito do heme sobre CE microvasculares na expressão de moléculas de adesão, geração de espécies reativas de oxigênio (ROS), atividade da caspase-1 e produção e liberação da citocina IL-1beta, in vitro. As células de linhagem HMEC-1 (CE microvascular humana; ATCC") serão cultivadas na presença/ ausência de heme, e posteriormente processadas para análises citofluorométricas. A citometria de fluxo será utilizada para avaliar: a expressão de moléculas de adesão ICAM-1, VCAM-1 e E-selectina na superfície da HMEC-1; a geração de ROS utilizando uma sonda fluorescente; e a ativação de caspase-1 através da sonda intracelular Fam-Flica assay®. O ensaio imunoenzimático (ELISA) será utilizado para avaliar a liberação da IL-1beta no sobrenadante das culturas. Com esses dados, buscaremos identificar possíveis correlações entre a expressão das moléculas de adesão, a geração de ROS, a produção citocina pró-inflamatória e a atividade da caspase-1 nas CE sob estímulo induzido com o heme. Esperamos encontrar evidências de que processos de hemólise intravascular, como o encontrado na AF, podem contribuir para a ativação endotelial na microcirculação. Posteriormente desejo publicar e apresentar em congressos os resultados encontrados.