"Caracterização estrutural, funcional e imunogênica de duas proteínas de Leptospira interrogans contendo domínios FecR"

• Processo: 23/08486-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2023
• Situação: Interrompido
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: João Pedro Gaspar Inácio
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/17488-2 - Avançando no entendimento da patogenicidade e virulência da Leptospira interrogans através de análises proteômicas, estruturais, mutagênicas e imunológicas, AP.TEM
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/14302-3 - Avaliação da interação das proteínas FecR rLIC10902 e rLIC20185 de Leptospira interrogans com células humanas e expressão heteróloga em Leptospira não patogênica, BE.EP.MS
• Assunto(s): Leptospira interrogans Proteínas recombinantes Biotecnologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Domínios FecR | Leptospira interrogans | Proteinas recombinantes | Biotecnologia

Resumo

Leptospiras patogênicas causam a leptospirose, uma zoonose globalmente disseminada. Essas bactérias colonizam os túbulos renais de animais, sendo excretadas na urina. O homem é o hospedeiro acidental e terminal, apresentando diferentes manifestações clínicas. A doença acomete cerca de 1 milhão de pessoas anualmente, resultando em cerca de 60 mil mortes. Os mecanismos de patogenicidade e infecção da Leptospira spp. ainda não estão completamente elucidados. Uma alternativa para compreender tal função está relacionado a desvendar os mecanismos desempenhados por suas proteinas. Proteínas com domínios FecR geralmente estão associadas ao metabolismo do ferro. O papel desse domínio em proteínas de leptospiras ainda não é compreendido. Assim, neste estudo, objetiva-se clonar, expressar e purificar as proteínas contendo o domínio FecR: LIC10902 e LIC20185 de L. interrogans sorovar Copenhageni, e avaliar suas propriedades funcionais e imunogênicas. Para isso, os genes serão amplificados por PCR, clonados no vetor pAE e expressos em diferentes linhagens de Escherichia coli para estudo de solubilidade. A purificação será realizada por cromatografia de afinidade a metal e a estrutura das proteínas será avaliada por dicroísmo circular. A expressão diferencial das proteínas-alvo em estipes patogênicas e atenuadas de L. interrogans e na espécie saprofítica Leptospira biflexa e a alteração de sua expressão frente à escassez de ferro, serão avaliadas por PCR quantitativo em tempo real. A avaliação imunogênica das proteínas em camundongos BALB/c e a determinação da localização das proteínas-alvo na célula bacteriana serão realizadas por ELISA. A detecção imunológica das proteínas-alvo será feita por western blotting com soro hiperimune de camundongos. A interação das proteínas com receptores celulares e componentes humanos associados à matriz extracelular e plasma será testada para caracterização funcional. A obtenção e validação imunológica, estrutural e funcional dessas proteínas contribuirão para avançar os estudos sobre a patogenicidade das leptospiras.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

GASPAR, JOAO P.; TAKAHASHI, MARIA B.; TEIXEIRA, ALINE F.; NASCIMENTO, ANA L. T. O.. In silico analysis and functional characterization of a leucine-rich repeat protein of Leptospira interrogans. INTERNATIONAL JOURNAL OF MEDICAL MICROBIOLOGY, v. 316, p. 11-pg., 2024-09-03. (19/17488-2, 19/05466-4, 16/11541-0, 23/08486-1, 17/26223-7)