Purificação e análise proteômica top-down de PD-1 (programmed cell death 1 protein) em linfócitos T CD8+ de pacientes com câncer de cabeça e pescoço

• Processo: 23/08471-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2023
• Data de Término da vigência: 13 de outubro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Adriana Franco Paes Leme
• Beneficiário: Reynaldo Magalhães Melo
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/18496-6 - O papel do álcool na transformação de células orais mediada por vesículas extracelulares, AP.TEM
• Assunto(s): Neoplasias de cabeça e pescoço Linfócitos T PD-1 Proteômica Espectrometria de massas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer de cabeça e pescoço | Linfócitos T | Pd-1 | Proteoformas | Proteômica top-down | Proteômica por espectrometria de massas

Resumo

O câncer de cabeça e pescoço (CCP) é o sétimo tipo mais comum de câncer, apresentando sobrevida de aproximadamente 50% após 5 anos. Os inibidores de checkpoint nivolumab e pembrolizumab são utilizados como imunoterapicos no tratamento de CCP, no entanto, esse procedimento apresenta uma resposta durável sub-ótima (~15%). Esses inibidores tem como alvo a proteína PD-1 (programmed cell death 1 protein), altamente expressa em linfócitos T, a qual é capaz de inibir a ativação dessas células e afetar a imunidade antitumoral. A PD-1 apresenta refinado mecanismo de regulação de atividade, interação e degradação por modificações pós-traducionais (PTMs), além de ser suscetível a splicing alternativo. A proteômica top-down (TD) apresenta grande capacidade para descoberta de PTMs, sendo considerada a principal técnica para caracterização de proteoformas. Sendo assim, esse projeto foi delineado para analisar as proteoformas de PD-1 presentes nas membranas de linfócitos T CD8+ de pacientes de CCP com ou sem metástase linfonodal por meio de proteômica TD. Essa análise foi delineada da seguinte maneira: 1) análise global de proteoformas de membrana; 2) caracterização das proteoformas de PD-1 purificadas por enriquecimento de membrana e cromatografia líquida; 3) identificação e quantificação de proteoformas de PD-1 imunopurificadas com diferentes anticorpos primários. A partir dessas análises serão reveladas as proteoformas de PD-1. Essa nova perspectiva tem o potencial de descobrir proteoformas que influenciam no reconhecimento dos anticorpos usados na imunoterapia de CCP, além de identificar regiões na proteína com potencial para o desenvolvimento de terapias imunológicas baseadas na inibição de PD-1. (AU)