Análise de eficiência de edição genética e de expansão das linhagens de modelos celulares isogênicos submetidos a metodologias de CRISPR/Cas9

• Processo: 23/14935-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Mariana Moysés Oliveira
• Beneficiário: Lais Amanda de Souza Cunha
• Instituição Sede: Associação Fundo de Incentivo à Pesquisa (AFIP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/09089-0 - Edição genética em larga escala para o estudo de doenças do neurodesenvolvimento em modelos celulares isogênicos, AP.JP
• Assunto(s): Células-tronco neurais Células-tronco pluripotentes induzidas Diferenciação neuronal Neurogenética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células-tronco neurais | Células-tronco Pluripotentes Induzidas | Diferenciação neuronal | Doenças do Neurodesenvolvimento | Edição genômica | Regulação epigenética | Neurogenética

Resumo

Introdução: Variantes genéticas raras de novo de perda de função (LoF) em genes que codificam reguladores da expressão gênica constituem fatores de risco comumente associados às doenças do neurodesenvolvimento (NDDs). POGZ representa um grande modelo dentro dessa classe de genes, de forma que variantes raras nesse gene estão associadas à síndrome de White-Sutton. Objetivos: Estabelecimento de modelos isogênicos de células-tronco humanas pluripotentes induzidas (hiPSC) com uma variante de LoF em POGZ observada em pacientes e avaliação das consequências funcionais da introdução dessa variante, bem como avaliação da eficiência das metodologias utilizadas para a edição genética. Métodos: A metodologia de engenharia genômica CRISPR/Cas9 será utilizada para a introdução das variantes em hiPSC usando dois gRNAs para gerar deleção gênica e, dessa forma, um modelo bona fide de LoF, e Prime Editing para gerar variante de LoF específica de pacientes. Resultados esperados: A avaliação das consequências funcionais permitirá a identificação de similaridades entre os fenótipos celulares resultantes das variantes introduzidas, permitindo avaliar se a variante encontrada em pacientes age pelo mecanismo de haploinsuficiência. A avaliação da eficiência das metodologias de edição genética utilizadas possibilitará a confirmação de maior eficiência atrelada à metodologia de Prime Editing, utilizada para a variante específica de pacientes, em comparação com a de CRISPR/Cas9, relacionada à introdução de deleção gênica.