SILENCIAMENTO DE RNAs NÃO CODIFICADORES LONGOS ENRIQUECIDOS EM CÉLULAS-TRONCO TUMORAIS PANCREÁTICAS ATRAVÉS DO SISTEMA CRISPR-Cas13d INDUZÍVEL

• Processo: 23/08998-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Daniela Sanchez Basseres
• Beneficiário: Andressa Albuquerque Seiffert
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Oncologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células tronco-tumorais (CTTs) | CRISPR-Cas13d | Pdac | Oncologia

Resumo

O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) é uma doença extremamente letal e corresponde a mais de 90% dos casos de tumores no pâncreas. A alta letalidade se deve, em parte, à resistência quimioterápica intrínseca ou adquirida pelo tumor e ao elevado potencial metastático desse tipo de câncer, sendo a metástase um evento precoce na evolução de PDAC e presente em 50% dos pacientes diagnosticados. A capacidade metastática e quimiorresistência do tumor estão associadas à aquisição e manutenção de um fenótipo tronco-tumoral por uma população de células conhecidas como células-tronco tumorais (CTTs). As CTTs possuem alterações epigenéticas que conferem, dentre outros, a capacidade de migração e invasão das células tumorais, além da resistência terapêutica. Apesar da importância dessas células para a biologia do PDAC, os mecanismos envolvidos na obtenção e na manutenção do fenótipo tronco-tumoral ainda são pouco compreendidos. Com base na hipótese de que os eventos epigenéticos envolvidos na aquisição do fenótipo tronco-tumoral podem ser mediados por RNAs não codificadores longos (lncRNAs), nosso grupo identificou lncRNAs enriquecidos em CTTs. Para estudar o papel funcional desses RNAs na quimiorresistência e metástase, será realizado o silenciamento dessas moléculas pelo sistema CRISPR-Cas13d, que combina a expressão de um RNA guia para o alvo de interesse com a expressão da Cas13d, uma endonuclease altamente específica de RNA. Assim, o objetivo deste projeto é gerar linhagens tumorais pancreáticas expressando a Cas13d de maneira induzível por doxiciclina, que serão subsequentemente usadas para expressar os RNAs guias de interesse. O desenvolvimento e validação deste modelo será crucial para a elucidação do papel funcional dos lncRNAs identificados e, portanto, espera-se que este projeto vá fazer uma contribuição essencial para elucidar os mecanismos envolvidos na malignidade do PDAC, contribuindo para o desenvolvimento de terapias mais efetivas.