Mapeamento das regiões de contato entre cochaperonas da família Hsp40 e proteínas envolvidas com doenças amiloidogênicas visando a compreensão dos mecanismos de reativação de agregados proteicos

• Processo: 23/10199-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Fixação de Jovens Doutores
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2023
• Data de Término da vigência: 12 de maio de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Acordo de Cooperação: CNPq
• Pesquisador responsável: Carlos Henrique Inacio Ramos
• Beneficiário: Ana Paula Ribeiro Povinelli
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/01237-6 - Mapeamento das regiões de contato entre cochaperonas da família Hsp40 e proteínas envolvidas com doenças amiloidogênicas visando a compreensão dos mecanismos de reativação de agregados proteicos, AP.R
• Assunto(s): Dobramento de proteína Estrutura e função de proteínas Proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Enovelamento de proteínas | estrutura e função de proteínas | homeostase proteica | Proteína

Resumo

Os relatos de doenças envolvidas com o enovelamento incorreto de proteínas aumentaram consideravelmente a partir das descobertas de que agregados proteicos podem ser formados nas células e podem desencadear citotoxicidade. Portanto, chaperonas moleculares e/ou proteínas do choque térmico (HSPs; Heat Shock Proteins) por terem papel relevante como auxiliadoras da homeostase proteica, se tornaram candidatas naturais no estudo de estratégias de tratamento para essas doenças. As chaperonas da família Hsp70 estão envolvidas na ajuda ao enovelamento proteico, sendo auxiliadas principalmente por cochaperonas da família Hsp40 (DNAJ), que se dividem em subclasses A, B e C, sendo que A e B reconhecem e transferem proteínas parcialmente desenoveladas para a Hsp70. Recentemente, foi mostrado que, em humanos, complexos de chaperonas formados por Hsp70/DNAJB/Hsp110 estão envolvidas com reativação de agregados, onde aparentemente proteínas da subclasse DNAJB possuem papel seletivo no reconhecimento dos diferentes agregados. Neste projeto propomos um aprofundamento desse conhecimento visando a compreensão dos mecanismos conformacionais e das regiões de contato entre uma cochaperona humana da família DNAJB e proteínas envolvidas com doenças amiloidogênicas. Para tanto propomos: 1)expressar e purificar pelo menos duas DNAJ humanas do tipo B; 2) expressar mutantes para escrutinar o papel das regiões amino e carboxi terminais no processo de interação com HSP70 e de dimerização, respectivamente; 3)caracterizar as DNAJB humanas quanto à interação e reativação de amiloides de alfa-sinucleína; 4)assinalar pelo menos uma DNAJB humana por ressonância magnética nuclear (RMN), usando os dados obtidos para o homólogo de levedura; 5) expressar mutantes fosfomiméticos para entender o papel de modificações pós-traducionais na função da DNAJB. Os resultados obtidos possuem alto potencial para contribuir com a compreensão dos mecanismos de reativação de agregados proteicos.